網膜血管内皮細胞に対する障害因子の形態学的研究

视网膜血管内皮细胞损伤因素的形态学研究

• 批准号: 63570825
• 负责人: 望月 学
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570825/
• 关键词: ウシ網膜血管内皮細胞; 分離培養; 糖負荷; F-アクチン染色; 立体的細胞集塊; 基底膜様物質蓄積; 高濃度グルコースの増殖抑制

網膜血管内皮細胞をウシ眼より分離培養して種々の負荷下における形態学的変化について検討した。1)対照(無負荷)培養開始後3日目頃より血管片周囲に細胞が出現しはじめ,培養7日目で血管片周囲に円形の核をした核小体の明瞭な細胞が認められた。培養4週目になると敷石状に細胞が配列した。さらに継続して培養すると,同一培養皿内に細胞突起を延ばし重層化を示す線維芽細胞様の細胞群も出現してきた。これをのぞくため初代培養2週間日に細小血管片をのぞき,培養4週目に最小希釈法によりクローニングを行い血管内皮のみを分離した。これは第VIII因子関連抗原陽性が免疫組織化学的に確認されて血管内皮細胞であることが確認された。2)糖負荷の影響培養3〜5代目のウシ網膜血管内皮細胞をチャンバースライド内にまき,ローグルコース濃度が100mg/dl,200mg/dl,400mg/dlの培養液で3週間培養した。グルコース100mg/dlで7日間培養すると細胞密度の疎な部分が混在した。F-アクチン染色では細胞集塊は平面的に接合しており細胞間に比較的均一に染色されている。グルコース200mg/dlでは,内皮細胞が重層化し,立体的な細胞集塊がみられ,この集塊の中に基底模様物質の集積がみられた。F-アクチン染色では,細胞集塊突起部に濃く染色された。グルコース400mg/dlでは,細胞密度が低く,変性した細胞が多く認められるようになったが,立体的細胞集塊はかえって多くみられた。走査電顕では,グルコース100mg/dlでは細胞接合部に指嵌像がみられたが,400mg/dlでは細胞間が大きくあいていた。ガラクトース負荷でも上記グルコースと同様の変化がみられた。インスリン負荷のみでは今回検討した濃度では対照と有意差がみられなかった。

The morphological changes of <s:1> て species of における under 々 <s:1> load in the isolation and culture of をウシ ocular よ <s:1> retinal vascular endothelial cells に に て検 て検 て検 て検 discuss the た. 1) according to (no load) seaborne develop after the start of 3 orders, recollected よ り vascular piece weeks 囲 に cells appear が し は じ め, cultivate 7 orders で vascular piece weeks 囲 に has drifted back towards &yen; form の nuclear を し た nucleosome の clear が な cells to recognize め ら れ た. Culture 4 weeks of になると stellate に cells が and line with <s:1> た. さ ら に 継 続 し て cultivate す る と, に cellular processes within the same dish を delay ば し heavy stratification を す line d bud cells others の cells appear も し て き た. こ れ を の ぞ く た め original training 2 weeks tertian に small blood vessels piece を の ぞ き, 4 weeks training item に minimum bush 釈 に よ り ク ロ ー ニ ン グ を line い endothelial の み を separation し た. Youdaoplaceholder0 れ positive factor VIII associated antigen が immunohistochemical に confirmation されて vascular endothelial cells である とが とが とが された confirmation された. 2) sugar load の impact on cultivating 3 ~ 5 generations の ウ シ retinal vascular endothelial cells を チ ャ ン バ ー ス ラ イ ド within に ま き, ロ ー グ ル コ ー が ス concentration of 100 mg/dl, 200 mg/dl, 400 mg/dl で の cultures of 3 weeks training し た. Youdaoplaceholder0 グ コ ス ス ス100mg/dlで7 day culture すると cell density <s:1> 疎な part が mixed in た た F - ア ク チ ン dyeing で は cells in the plane of the set piece は に joint し て お り に comparison between cells of uniform に dyeing さ れ て い る. グ ル コ ー ス 200 mg/dl で は, endothelial cell が stratification し, stereo set piece が な cells み ら れ, こ の agglomerate の の に basal model others material in the set product が み ら れ た. F-ア チ チ <s:1> staining で, に thick く staining された of the cell aggregate protrusions. グ ル コ ー ス 400 mg/dl で は, low cell density が く, - sex し た cells が く to recognize more め ら れ る よ う に な っ た が, three-dimensional cell agglomerate は か え っ て more く み ら れ た. Walkthrough electric 顕 で は, グ ル コ ー ス 100 mg/dl で は cells embedded joints に refers to like が み ら れ た が, 400 mg/dl で は large intercellular が き く あ い て い た. Youdaoplaceholder0, ト, ト, ス. The load で is denoted by グ, コ, コ, スと. The same is true for the <s:1> variation がみられた. This time, 検 is asked to discuss the <s:1> た concentration で がみられな and the と intentional difference of the と.