培養細胞を用いたNeuriteの形成と微小管結合蛋白質の研究

使用培养细胞研究神经突形成和微管结合蛋白

• 批准号: 63580140
• 负责人: 佐野 護
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63580140/
• 关键词: PC12; PC12D; 神経突起; NGF; cAMP; MAP; 微小管結合蛋白質; 蛋白質燐酸化酵素

一般のPC12細胞と異なり、NGFだけでなくcAMP上昇薬によってもneuriteを伸ばし、しかもその反応が著しく速い亜株、PC12Dを樹立し発表した。(J.Neurosci,Res,17:36-44,'87)。この細胞を用いて以下の研究結果を得た。1.MAP1,MAP2に対する抗体による免疫螢光観察によって、MAP1は細胞質、neuriteとバリコシティー、growth coneに局在し、MAP2は特に細胞核周辺に局在した。NGFやcAMP上昇薬による細胞分化に伴って、いずれも顕著な螢光の増加が認められた。MAP1の燐酸化部位を認識する抗体では、特にgrowth coneへの局在が見られ、突起伸張制御との関連が示唆された。2.MAP1,MAP2抗体を用いたWestern blotting法により、PC12細胞の分化に伴うこれらの蛋白質の量的変化を調べたところ、PC12D細胞ではNGFだけでなく、cAMPによっても増加する事が観察されたが、通常のPC12細胞の場合、cAMPでは変化せず、neuriteの成長と完全な一致が見られた。またPC12D細胞は未処理でも、MAP1の量がPC12細胞より多く、NGF、cAMPに反応しより敏速にneuriteを伸ばす原因である可能性が推測された。3.ウシ脳より調整した微小管蛋白質を基質として、〔^<32>P〕ATPを使って、NGFまたはcAMPで数分間処理した細胞抽出液における蛋白質燐酸化活性を調べた、いずれの場合も、MAP2を燐酸化する活性が、3〜8倍に上昇する事実を認めた。一方はA-キナーゼであったが、もう一方はこれまでに報告されていない酵素である可能性が高く、今後追究したい。4.PC12D細胞は、NGFによる形態分化の誘導が著しく早く、この特徴は、NGFの生物活性測定に有効と思われ検討したところ、大変利用価値があることが示された。発表後、諸外国および国内の研究者より、PC12D細胞の分与依頼が相次ぎ、既に20以上の他の研究室で使用されつつある。

In general, the PC12 cell number is different, the NGF cell line is the cAMP, the neurite cell line is the highest, the PC12D cell line is the fastest, and the table is set up. (J. Neuroscithology Respon 17 Rd 36-44 Jr 87). The results of the study were obtained by using the results of the study. 1. MAP1 immunized MAP2 antibody antibody detected by light, MAP1 cell, neurite cell, growth cone cell, MAP2 cell, perinuclear cell, and so on. On the NGF cAMP, the cell differentiation is accompanied by the cell differentiation, and the light is added to the cell differentiation. MAP1 acidified sites recognize antibodies, special growth cone sites, protuberances, and protrusions. 2. The antibodies to MAP1 and MAP2 were detected by differential Western blotting assay, PC12 cell differentiation assay, PC12D cell cycle NGF assay, cAMP cell cycle assay, PC12 cell cycle assay, cAMP assay, and neurite cell growth assay. PC12D cells are not rational, map 1 cells are PC12 cells, NGF, cAMP cells are sensitive, neurite cells are sensitive, causes are probable, and probability pushes forward. 3. The microtubule protein (MAP2) gene, (^ & lt;32>P) ATP, NGF, cAMP, protein acidification activity, protein acidification activity, MAP2 acidification activity, and so on, were analyzed and analyzed. On the one hand, the possibility is high, and the other side will investigate the situation in the future. 4.PC12D cell differentiation, NGF cell differentiation, and NGF bioassay are used to determine the biological activity of the cell, the cell, the cell and the cell. At the back of the table, foreign researchers and domestic researchers, PC12D cells, and other laboratories above 20% are used in this study.

项目成果

佐野護: Brian Research. 459. 404-406 (1988)

佐野守：布莱恩研究 459. 404-406 (1988)

佐野護: J.Neuroscience Research.

佐野守：J.神经科学研究。

佐野護: 第12回神経科学学術集会予稿集. 98 (1988)

Mamoru Sano：第十二届神经科学学术会议论文集 98 (1988)。

佐野護: 発達障害研究所年報. 17. (1989)

Mamoru Sano：发育障碍研究所年度报告 17。（1989）

佐野護: 神経化学. 27 (1). 90-91 (1988)

佐野守：神经化学 27 (1)。