新しい特性を有する酵素の遺伝子解析

具有新特性的酶的遗传分析

基本信息

  • 批准号:
    01560087
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.02万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1989
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1989 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

(1)新機を有するアミラ-ゼの遺伝生化学的研究本研究室で分離したBacillus circulans F-2はバレイショ生澱粉を分解する酵素(RSDA),cl^-依存性で飽和Naclでも活性の変わらないα-アミラ-ゼ(CDA)やアミラ-ゼとプルラナ-ゼ活性を同等に有する酵素等を生産する。RSDA:pHA300にコ-ドされているRSDA遺伝子をsnbcloningし、dideoxy法により、また、本DNA断片をplasmidに組み替え一連のdeletion mutantを作製し、kilo sequencing法によりDNA塩基配列を完全に決定した。この結果、2508bpのORFを持ち、836のアミノ酸残基からなり、N末端にはsignal sequenceとして34アミノ酸残基を持っていた。アミラ-ゼに共通な活性部位に関係している4つのhomologous regionは主にN末端側に存在していた。また他の生澱粉分解酵素、および結晶性セルロ-ス分解酵素らと共通なthrとser残基を含むregionはC末端側に存在していることが判った。CDA:本遺伝子は1164bpのORF(388アミノ酸)分子量38,005daの蛋白質で20個のsignal配列を持っていることが判った。他のアミラ-ゼとの相同性検索の結果、RSDAと同様に4ヵ所の領域が見つかった。(2)ニトロゲナ-ゼニトロゲナ-ゼComponent Iに対して特異的に結合するモノクロ-ナル抗体8株(MA1〜8)を取得し、これらの8種の抗体を内からアセチレン還元活性を選択的に阻害するMA1、水素ガス発生活性を選択的に阻害するMA2、両者をともに阻害するMA8を選択した。次に、大腸菌で様々な長さを持つnifD断片を発現させモノクロ-ナル抗体を反応させ塩基配列解析の結果、MA1はComponent IのαサブユニットのN末端に近い領域を、MA2はC末端に近い領域を、MA8はその中間の領域をそれぞれ認識していることが判明した。
(1)A new type of enzyme, Bacillus circulans F-2, was isolated and produced in our laboratory. The enzyme was used to decompose starch. RSDA: pHA300-pHA300-pHA300- As a result, the ORF of 2508bp was maintained, the signal sequence of 836 bp was maintained, and the signal sequence of 34 bp was maintained. 4. Homologous region exists on the N-terminal side of the main active site. Other amylolytic enzymes, including crystalline amylolytic enzymes, contain common thr residues and C-terminal residues. CDA: This gene contains 1164bp ORF(388 amino acids) with a molecular weight of 38,005 da and 20 signal sequences. The results of the identity search of RSDA and RSDA are shown in the following fields: (2)8 strains (MA1 - 8) of antibody-specific antibodies were obtained, and 8 kinds of antibodies were selected from MA1, MA2 and MA8 for inhibition of reactivation activity. In addition, the detection of nifD fragment in Escherichia coli, the detection of nifD fragment in MA1, the detection of nifD fragment in MA2, and the detection of nifD fragment in MA8.

项目成果

期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
丸山芳治: "B.Circulans F-2の多機能酵素たん白Amylase-Pullulanase遺伝子のクロ-ニング" 第62回日本生化学会大会. 61. 859 (1989)
Yoshiharu Maruyama:“B.Circulans F-2 多功能酶蛋白淀粉酶-支链淀粉酶基因的克隆”,第 62 届日本生化学会年会 61. 859 (1989)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
丸山芳治: "Substrate specificity of cysteine proteinese from sprouting potato tubers." Agric.Biol.Chem.53. 1159-1160 (1989)
Yoshiharu Maruyama:“来自发芽马铃薯块茎的半胱氨酸蛋白的底物特异性。”Agric.Biol.Chem.53(1989)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
丸山芳治: "Amylasepullulanase enzyme produced by B circulans F-2." Biochim.Biophys.Acta.991. 388-394 (1989)
Yoshiharu Maruyama:“由 B circulans F-2 产生的淀粉酶。Biochim.Biophys.Acta.991 (1989)。”
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  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
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  • 通讯作者:
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  • 批准号:
    01602007
  • 财政年份:
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    $ 1.02万
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    $ 1.02万
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  • 批准号:
    57030020
  • 财政年份:
    1982
  • 资助金额:
    $ 1.02万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Environmental Science
陸域及び水域における硝化脱窒過程が人間生存環境に及ぼす影響
土地和水体硝化和反硝化过程对人类生存环境的影响
  • 批准号:
    56030022
  • 财政年份:
    1981
  • 资助金额:
    $ 1.02万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Environmental Science
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土地和水体硝化和反硝化过程对人类生存环境的影响
  • 批准号:
    X00023----503025
  • 财政年份:
    1980
  • 资助金额:
    $ 1.02万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Environmental Science
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  • 批准号:
    X00080----448046
  • 财政年份:
    1979
  • 资助金额:
    $ 1.02万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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