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卵母細胞および発生初期の胚におけるプロテインキナ-ゼC・アイソザイムの証明

卵母细胞和早期胚胎中蛋白激酶 C 同工酶的演示

基本信息

批准号：
01570009
负责人：
山村英樹
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.卵母細胞におけるプロテインキナ-ゼC(以下Cキナ-ゼ)・アイソザイムの証明(1)B6C3F_1マウスの一次卵母細胞(細胞全体)および二次卵母細胞(凍結切片)に、Cキナ-ゼ・アイソザイムI型、II型およびIII型にそれぞれ特異的な単クロ-ン抗体MCー1a、MCー2aおよびMCー3aを用いて免疫蛍光光染色を施したところ、MCー2aおよびMCー3aとの反応による蛍光が観察され、MCー1aとのインキュベ-ションによって特異的な蛍光は認められなかった。すなわち、マウスの一次および二次卵母細胞には、Cキナ-ゼ・アイソザイムII型とIII型が存在することがわかった。(2)アフリカツメガエルの二次卵母細胞のホモジェネ-トを10万×gで遠心分離して得た上清について、DEAEセルロ-スカラムクロマトグラフィ-およびSDSーPAGEを経て、上記の3種類の単クロ-ン抗体を用いてイムノブロッティングを行ったところ、いずれの抗体によっても分子量約8万の位置にバンドが出現した。このことから、アフリカツメガエルの二次卵母細胞の可溶性画分には、Cキナ-ゼ・アイソザイムI型、II型およびIII型のすべてが存在することが明らかとなった。2.着床前のマウス胚におけるCキナ-ゼ・アイソザイムの証明B6C3F_1マウスの1、2、4細胞期胚(凍結切片)および胚盤胞(胚全体)に、MCー1a、MCー2aおよびMCー3aを用いて免疫蛍光染色を施したところ、すべてのステ-ジの胚で、MCー2aおよびMCー3aとの反応による蛍光が割球および残存している極体の細胞質に観察され、MCー1aとのインキュベ-ションによっては特異的な蛍光は認められなかった。本研究により、マウスでは一次卵母細胞から胚盤胞までは、Cキナ-ゼ・アイソザイムの少なくとも2種類(II型、III型)が存在することがわかった。

1. Oocyte development: (1)B6C3F_1: primary oocyte (whole cell) and secondary oocyte (frozen section): type I, type II and type III: specific antibodies MC1a, MC2a and MC3a: immunofluorescent staining MC-2a and MC-3a are the two most important components of the system. The primary and secondary oocytes of the oocytes are divided into two groups: type II and type III. (2)The secondary oocytes were isolated from 100 000 ×g of supernatant by telecentric separation, DEAE and SDS PAGE. The three kinds of antibodies mentioned above were used in the study. The molecular weight of the antibodies was about 80 000. The soluble fraction of secondary oocytes from these oocytes is C, D, D, D, 2. B6C3F_1: 1, 2, 4 cell stage embryos (frozen sections), blastoderm cells (whole embryos), MC-1a, MC-2a, MC-3a were detected by immunoluminescence staining. MC 1a and 1b are different from each other. In this study, there were two types of oocytes (type II and type III) in the primary oocyte blastoderm.