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着床前発生過程におけるカルシウム/カルモデュリン系情報伝達に関する研究

着床前发育过程中钙/钙调蛋白系统信息传递的研究

基本信息

批准号：
04670012
负责人：
山村英樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カルシウム/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼのひとつであるミオシン軽鎖キナーゼの着床前発生への関与を調べるために,この酵素の選択的阻害剤であるML-9を培養条件下でB6C3F_1マウスの着床前胚に作用させて,胚に起る変化を観察した。まず,胚を2細胞期からML-9を1-20μM含む培地で4日間培養したところ,胚の発生に用量依存性の影響が認められた。すなわち,ML-9の1μMに暴露された胚は対照と同様に発生したが,5μMに暴露された胚のなかにはcompactionを起さないものがあり,20μMに暴露された胚の大部分で4細胞期より先へ発生が進まなかった。ML-9の0(対照),1,5,10,15および20μMに暴露された胚の培養4日目における細胞数は,それぞれ103.5,100.2,16.2,11.3,7.4および3.9であり,5μM以上のML-9に暴露された胚の細胞数は対照の胚のそれよりも有意に少なかった。つぎに,4細胞胚,8細胞胚,compactionを起している8細胞胚および初期胚盤胞を10μMのML-9に12時間暴露し,ML-9に対する胚の感受性の発生段階による違いを検討した。その結果,初期胚盤胞はその75%が虚脱し,最も感受性が高いことがわかった。それに対して,4細胞胚では影響が最も少なかった。8細胞胚ではcompactionが,compactionを起している8細胞胚では胚盤胞腔の形成が,それぞれ抑制された。ML-9への暴露終了後,胚を正常培地へ移すと,大部分の胚は胚盤胞にまで発生した。しかし,それらの胚盤胞の細胞数を調べたところ,4細胞期にML-9に暴露されたものを除き,細胞数は対照と比較して有意に少なかった。以上の結果は,ミオシン軽鎖キナーゼがマウスの着床前発生に関与することを示唆している。

The enzyme selection inhibitor ML-9 was used to investigate the effects of B6C3F_1 on preimplantation embryo development and embryo initiation under culture conditions. The dose-dependent effect of ML-9 on embryo development was also observed during 4-day culture in the presence of medium at 2-cell stage. 1μM exposure to ML-9 resulted in embryo development at the same time, 5 μM exposure resulted in embryo compaction at the same time, and 20 μM exposure resulted in embryo development at the 4-cell stage in most cases. Cell counts of embryos exposed to ML-9 at 0, 1, 5, 10, 15, and 20μM were 103.5, 100.2, 16.2, 11.3, 7.4, and 3.9, respectively. Cell counts of embryos exposed to ML-9 at 5 μM and above were intentionally decreased. 4-cell embryo, 8-cell embryo,compaction initiation, 8-cell embryo and early blastoderm cells were exposed to ML-9 at 10μM for 12 hours, and ML-9-induced embryo susceptibility development was investigated. 75% of embryo cells collapsed in the early stage, and the highest sensitivity was high. 4-cell embryos are the least affected. 8-cell embryo has no compaction,compaction is initiated, 8-cell embryo has no formation of blastoderm cavity, it is inhibited. After exposure to ML-9, embryos were transferred to normal culture, and most of the embryos developed into blastocysts. The number of cells in the blastoderm was adjusted to 4-cell stage. The number of cells in the blastoderm was decreased. The above results indicate that Miosini is related to the pre-implantation development of the mouse.