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着床前発生過程におけるcompactionの成立機構に関する研究

着床前发育过程中致密化形成机制的研究

基本信息

批准号：
61570010
负责人：
山村英樹
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570010/
关键词：
Compaction カルモデュリン Cキナーゼ W-7 W-5 PMA H-7 マウス

项目摘要

1.Compactionへの【Ca^(2+)】-カルモデュリンの関与(1)Compactionを起していない8細胞期のICRマウス胚を、正常培養液で4,8または12時間培養したところ、それぞれ56.6,82.5および88.6%の胚がcompactionを起した。同じ発生段階の胚をカルモデュリン阻害剤W-7添加(25μM)培養液で4,8または12時間培養した場合、compactionを起した胚の頻度はそれぞれ0.9,1.3およびO%であった。それに対して、カルモデュリンに対する親和性がW-7の1/9ないし1/7しかないW-5添加(25μM)培養液で同様の培養を行ったところ、4,8および12時間でそれぞれ22.0,51.5および60.3%の胚がcompactionを起した。(2)8細胞期のICRマウス胚を正常培養液で4時間培養してcompactionを起させたものを、25μMまたは50μMのW-7添加培養液で培養したところ、それぞれ2時間および8時間以内にcompactionしていない状態にもどった(decompaction)。これに対して、50μM以下のW-5を添加された培養液中では、胚のdecompactionは起らなかった。以上の結果は、compactionへの【Ca^(2+)】-カルモデュリンの関与を示唆している。2.CompactionへのCキナーゼの関与2,4または8細胞期のICRおよびB6C3【F_1】(C57BL/6×C3Hの【F_1】)マウス胚を、Cキナーゼ活性化作用を有するPMA1nM添加培養液で8ないし72時間培養したところ、分割が抑制されて発生の進行が遅れたが、compactionおよび胚盤胞形成は行われた。そこで、Cキナーゼの選択的阻害剤H-7(25μM)とPAM(1nM)とを同時に添加された培養液で胚を培養したところ、PMA単独添加による影響は消失せず、同じ影響が高度に現われた。すなわち、Cキナーゼがcompactionに関与するという証拠は得られなかった。今後、抗Cキナーゼ抗体を使ってさらに検討したい。

1. Compaction of [Ca^(2+)]-free radicals and (1)Compaction of 8-cell ICR embryos and 4 - 8-cell ICR embryos cultured in normal medium for 12 hours. The frequency of embryo initiation was 0.9%, 1.3%, and 0.8%, respectively, when the embryo was incubated at the same stage and the inhibitor W-7 was added (25μM) to the culture medium for 4, 8, and 12 days. The affinity of the culture medium was 1/9 of W-7 to 1/7 of W-5 added (25μM). The affinity of the culture medium was 22.0, 51.5 and 60.3% when the culture medium was added (25μM). (2)8 ICR embryos were cultured in normal culture medium for 4 hours, 25μM and 50μM W-7 were added to culture medium for 2 hours and 8 hours, respectively. In addition to W-5 at concentrations below 50μM, the embryo decomption was initiated. The above results show that the interaction between Ca^(2+) and Ca^(2+) is very important. 2. Compaction of C_2_3 and ICR and B_6C_3 (F_1)(C57BL/6× C_3H) in 8-cell stage. The effect of the inhibitor H-7(25μM) and PAM(1nM) on the embryo culture medium disappeared and the effect of PMA on the embryo culture medium increased.すなわち、Cキナーゼがcompactionに关与するという证拠は得られなかった。In the future, anti-C antibodies will be used in the investigation.