酵母人工染色体によるヒト21番染色体遺伝子クロ-ニングとダウン症候群の研究

使用酵母人工染色体进行人类 21 号染色体基因克隆和唐氏综合症研究

• 批准号: 01570513
• 负责人: 中井 博史
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570513/
• 关键词: 酵母人工染色体; 21番染色体遺伝子; 染色体単離; 巨大DNA; ダウン症候群

平成元年度は酵母人工染色体によるヒト21番染色体遺伝子クロ-ニングのための基礎となる研究を行い、次の結果を得た。(1) セル・ソ-タ-による21番染色体の単離ヒトリンパ球培養株(GM131A)からジキトニン法で分裂中期染色体を得,Hoechst33258で染色した。次にセルーソ-タ-(FACS440)装置紫外線光源を用い、染色体毎の分離パタ-ンを抽出。21番染色体を単離しえた。この単一21番染色体をクロ-ニング、マッピングに用いた。(2)NotI制限酵素断片の巨大DNA解析ヒトリンパ球から無傷のまま巨大DNAを分離するため、ゲルブロック法で細胞を固定しNotIを作用させた。これをパルスフィ-ルド電気泳動(LKBパルサフォ-)にかけ、酵母染色体をサイズマ-カ-とした。200Kb〜1.5Mbの巨大DNAはパルスタイム80秒、電圧165V(6V/cm)、泳動時間20時間でよく解析できることがわかった。次に特定DNA領域をオ-トラジオグラフィ-で検出できる条件を設定した。巨大DNAはサザンブロットを行う前に0.25N-HClで脱ブリン化、短波長UVをかけアルカリトランスファ-。サブスタンスKVセプタ-遺伝子をクロ-ニングレプロ-ブとして該当遺伝子を検出、この遺伝子域NotI断片が20Mb以上の巨大DNAであることを示した。(3)21番染色体遺伝子の酵母人工染色体クロ-ニングとマッピング今年度科学研究助成により以上の結果を得た。これは酵母人工染色体で21番染色体遺伝子を得る基礎となる。現在共同研究で得られた1ケの21番染色体遺伝子の酵母人工染色体クロ-ンのDNAについてin siter hybrilizationにて21番染色体上の由来を決定している。今後とも継続研究を行う。これまでに21q21部位からの酵母人工染色体クロ-ン1ケと同部位からcDNA遺伝子断片1ケを新らたに確認できている。

In the year of Pingchengyuan, the yeast artificial chromosome was divided into 21 chromosomes, and the results of the study were satisfactory. The main results are as follows: (1) the chromosomes of metaphase chromosomes were obtained by Hoechst33258 staining. (1) the chromosomes of metaphase chromosomes were obtained by Hoechst33258 staining. The ultraviolet light source of the FACS440 device is separated by the ultraviolet light source and the chromosome is separated by the ultraviolet light source. Twenty-one chromosomes were isolated from each other. The number of chromosomes is 21 times and the chromosomes are divided into two groups. (2) NotI restriction enzyme fragments "giant DNA analysis", "giant DNA", "giant NotI", "cell", "cell" and "cell". The LKB electrophoretic activity (EME), the yeast chromosome DNA, the yeast chromosome, and the yeast chromosomes. 200Kb~1.5Mb has a huge DNA speed of 80 seconds, 165V (6V/cm), and 20 hours of swimming time. Secondary DNA realm-specific domain settings are available. In the past, the 0.25N-HCl has been deactivated, and the short-wavelength UV has no effect on the performance of the large DNA. Please tell me that the KV sub-domain NotI fragment is a huge DNA above 20Mb. (3) Saccharomyces cerevisiae artificial chromosome, yeast artificial chromosome and yeast artificial chromosome. Saccharomyces cerevisiae artificial chromosomes were isolated from 21 chromosomes. Now we have jointly studied the origin of yeast artificial chromosomes (yeast artificial chromosomes), DNA chromosomes, in siter hybrilization chromosomes, 21 polyploid chromosomes. In the future, we will conduct a lot of research. Yeast artificial chromosome (yeast artificial chromosome), 21q21 site, yeast artificial chromosome, yeast artificial chromosome, cDNA chromosome, yeast artificial chromosome.

项目成果

山本良嗣 他: "ヒト・サブスタンスKレセプタ-の遺伝子マッピングと巨大DNA解析" 日本小児科学会雑誌. (1990)

Yoshitsugu Yamamoto 等人：“人类物质 K 受体的基因定位和大 DNA 分析”日本儿科学会杂志（1990 年）。

Hiroshi Nakai: "Gene mapping and molecular study of Down syndrome." Pediatric Review and Communication. (1989)

Hiroshi Nakai：“唐氏综合症的基因图谱和分子研究。”

F.Endo et al.: "Primary structure and gene localization of human prolidase." J.of Biological Chemistry. 264. 4476-4481 (1989)

F.Endo 等人：“人类脯氨酸酶的一级结构和基因定位。”

中井博史: "ダウン症候群" 今日の小児治療指針. 第8版. 233-234 (1989)

Hiroshi Nakai：《唐氏综合症》今日儿科治疗指南第 8 版（1989 年）。

K.Takeda et al: "Fine assignment of beta-hexosaminidase A alpha-subunit on 15q23-q24 by high resolution in situ hybridization." Tohoku J.of Experimental Medicine.

K.Takeda 等人：“通过高分辨率原位杂交对 15q23-q24 上的 β-己糖胺酶 A α 亚基进行精细分配。”