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ミトコンドリア脳筋症の治療に関する基礎的検討

线粒体脑肌病治疗的基础研究

基本信息

批准号：
01570543
负责人：
小林正紀
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570543/
关键词：
ミトコンドリア脳筋症皮膚繊維芽細胞 ATP産生能コハク酸

项目摘要

はじめに:ミトコンドリア脳筋症患者の皮膚繊維芽細胞を用いてATP産生能を測定することにより、各種基質、治療薬のミトコンドリア・エネルギ-産生能に対する影響をみる目的で、基礎的検討を行った。対象:複合体I欠損と複合体IV欠損の各2例の皮膚繊維芽細胞を用いた。いずれの症例も筋ミトコンドリアにより上記の診断がついている。研究方法:皮膚繊維芽細胞を培養後トリプシン処理し、その沈渣を0.25M蔗糖、20mMMOPS、20mMEDTA、pH7.4の溶液中でホモゲナイズ処理後、遠心しその上清を酵素液とした。基質として(1)5mMpyruvateと0.3mMmalate(2)5mMsuccinateと1μMrotenone、(3)1mMmalaeと5mMDL-acetylcarnitineの3種の反応系を用い、それらを含む反応溶液(0.25M蔗糖、25mMMOPS、1mMEDTA、5mMK_2HPO_4、1mMADP、pH7.4)に上記上清を加えて37℃、2時間反応させた。20%TCAで反応を終了させ産生されたATPをルミノメ-タ-(LKB1250)を用いて測定した。結果と考案:本方法では比較的少量の細胞(75cm^2フラスコ1個)で実験が可能で、しかもルミノメ-タ-を用いることによりATPを高感度に測定できた。複合体I欠損症では(1)、(3)の反応系でATP産生能の低下を示したが(2)のsuccinateを基質とした反応系では、両者ともATP産生は低下していなく、治療としてsuccinateの投与は有効と考えられた。一方、複合体IV欠損症ではすべての系ともATP産生は低下した。本法を用いて治療薬として考えられるCoQ、カルニチンなどを反応系に加え、ATP産生能をみることは、本症患児の治療の目安となり有効な方法と考えられた。

In order to determine the ATP production energy of skin fibroblast cells from patients with mitosis, we conducted a basic review of the effects of various substrates and therapeutic drugs on the ATP production energy. Target: Complex I deficiency and complex IV deficiency were used in 2 cases of skin cells. The diagnosis of the disease is recorded in the middle of the case. Methods: After culture, the cultured cells were treated with different concentrations of sucrose, 20 mM MOPS, 20 mM EDTA, pH 7.4. After culture, the supernatant was treated with different concentrations of enzyme. Three kinds of reaction systems including matrix (1)5 mM pyruvate to 0.3 mM malate (2)5 mM succinate to 1μ M rotenone,(3)1 mM malae to 5 mM DL-acetylcarnitine were used. The reaction solutions containing sucrose (0.25 M sucrose, 25 mM MOPS, 1 mM EDTA, 5 mM K_2HPO_4, 1 mM ADP, pH 7.4) were added at 37℃ for 2 hours. 20%TCA is the final product of ATP. Results: A small number of cells (75 cm^2, 1 cell) compared with this method were detected with high sensitivity to ATP. Complex I deficiency syndrome: (1),(3), ATP production energy is low,(2), succinate is low, ATP production is low, succinate is low, and ATP production is low. One side, complex IV deficiency syndrome, and ATP production are low. This method can be used to treat the disease, such as CoQ, ATP, etc.