ジャコウ腺(脂腺のモデル)の5α-レダクタ-ゼの特徴と精製

麝香腺5α-还原酶（皮脂腺模型）的特性及纯化

• 批准号: 01570568
• 负责人: 高安 進
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570568/
• 关键词: 5α-レダクタ-ゼ; ジャコウ腺

ジャコウ腺の可溶性分画に存在する5α-レダクタ-ゼを精製する目的で、以下の実験を行なった。比活性を高くすることと、可溶性分画に共存し高い活性を示す3α-hydroxysteroid oxidoreductase(3α-HSOR)と分離することを目標とした。精製方法について次のような検討を行なった。1)硫アン分画では20〜40%飽和で最も高い活性が得られた。比活性は4〜5倍上昇し、全活性の60〜70%が含まれた。しかし、3α-HSOR活性とはほとんど分離できなかった。2)Sephadex G-150カラムでは5α-レダクタ-ゼ活性は大部分void volumeに含まれ、一部は分子量4万付近にも認められた。比活性の上昇は約3倍であった。3α-HSOR活性は約1/5に減少した。3)そこで、20〜40%飽和硫アン分画をG-150カラムで濾過したところvoid fractionに約20倍高い5α-レダクタ-ゼ活性が得られた。しかし、これでは精製不十分であるので、これと組合せて用いる方法としてセルロ-スイオン交換体について検討中である。まず、pH6.5、10mMのクエン酸バッファ-中でホモジナイズして得た可溶性分画をDE-52カラムに通したところ、大部分の活性は素通りし、比活性の上昇もみられなかった。そこで、現在、バッファ-のpHを5.0から8.5まで色々に変え、バッチ法によりCM52、DE52で処理して5α-レダクタ-ゼが吸着されるか否か検索している。おそらくpH5.0、10mM酢酸バッファ-を用いるとCM52に完全に吸着され、pH7-7.5、10mM Tris-HC1バッファ-ではDE52に3α-HSORは吸着されるが、5α-レダクタ-ゼは吸着されないという結果が得られている。

The soluble fraction of the protein exists in the 5α-glucuronidase and is purified in the following ways: High activity, high solubility, high activity, 3α-hydroxystyroid oxidase (3α-HSOR), high separation Refined method of secondary examination and discussion 1)The sulfur content is 20 ~ 40% saturated and the highest activity is obtained. Specific activity increased by 4 ~ 5 times, total activity increased by 60 ~ 70%. 3α-HSOR activity is different. 2)Sephadex G-150 has a molecular weight of approximately 40, 000 and a void volume of approximately 5, 000. The activity is increased by about 3 times. 3α-HSOR activity decreased by about 1/5. 3) 20 ~ 40% saturated sulfur fraction G-150 is about 20 times higher than 5α- The method of the exchange is not very refined, and the method of the exchange is not very refined Soluble fractions were obtained at pH 6.5 and 10mM, and most of the active peptides were passable and the specific activity increased. The pH of CM52 and DE52 is 5.0 - 8.5. The pH of CM52 and DE52 is 5.0 - 8.5. When pH 5.0 and 10mM Tris-HC1 were used, CM52 was completely adsorbed, pH7-7.5 and 10mM Tris-HC1 was completely adsorbed, 3α-HSOR was adsorbed, 5α-HC1 was adsorbed and 5α-HC1 was adsorbed.