ジャコウ腺(脂腺のモデル)における5α-レダクターゼの細胞内局在

5α-还原酶在麝香腺中的亚细胞定位（皮脂腺模型）

• 批准号: 63570472
• 负责人: 高安 進
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570472/
• 关键词: 5α-レダクターゼ; スンクス; ジャコウ腺; 細胞内分布

(1)核分画の精製:スンクスのジャコウ腺を切除し、0.88M庶糖液にけん〓し、1.8M、2.2M庶糖液の上に重層し、1.7×10^4rpm.90分遠心した。しかし、組織中の脂質が多いためか、大部分は最上層に厚い膜となって溜まり、精製核を得ることはできなかった。そこで、ジャコウ腺を0.25庶糖液中でホモジナイズし、800×gで遠心後、沈渣を1.0M庶糖液にけん〓、1.4M液上に重層、9500rpm、30分遠心し、得られた沈渣を核分画として用いた。しかし、この核分画のprotein/DNAは12〜25と高く、800×gの沈渣とほとんど同じ値であった。(2)こうして得られた精製核も含めて、各分画の5α-reductase活性を測定したところ、全活性の58%が粗核分画(800×g、沈渣)、21%が精製核分画に、27%がサイトゾール分画に認められた。ミトコンドリア、ミクロゾーム分画にはそれぞれ約8%の活性が認められた。すなわち、サイトゾール分画にも明らかに高い5α-reductase活性が見られたことが特異であった。サイトゾール中のDNA量は精製核分画の20%以下であるので、単に核の5α-reductase活性がサイトゾールに混入したものとは考え難い。また、蛋白当り比活性としても、精製核、サイトゾール間に差を認めなかった。比較のために、ヌードマウスに継代している。ヌンスクのアンドロゲン反応性毛包脂腺腫瘍について同様の実験を行なったところ5α-reductase活性は精製核分画とミトコンドリア分画にあわせて約80%が局在した。また、精製核分画はサイトゾール分画に比べて、蛋白当りの比活性において15倍の高値を示した。(3)ホモジネートを用いた予備実験において、Km値を異にする二種の5α-reductase(1.5×10^<-6>Mと3×10^<-5>M)の存在を示唆する成績が得られたので、核分画、サイトゾールを0.07〜50μMのH^3-テストステロンとインキュベートし、それぞれのKm値を求めた。しかし、いずれの分画でもsaturation curveに変曲点はなく、Km値は10^<-5>Mのオーダーにあると推測された。

(1)The nuclear analysis was carried out by means of the following procedures: removal of the thyroid gland, 0.88M sucrose solution, 1.8M, 2.2M sucrose solution, 1.7× 10^4rpm. 90 min telecentricity. Most of the lipids in the tissue are thick and thin, and the refined core is obtained. After centrifugation at 800×g, sediment at 1.0M sucrose solution, sediment at 1.4M supernatant, 9500 rpm, 30 min centrifugation, sediment at 0.25 min sucrose solution, sediment at 9500rpm, sediment at 1.4M supernatant, sediment at 9500rpm. The protein/DNA ratio of the nuclear analysis is 12 ~ 25, 800×g and the protein/DNA ratio is 800×g and the protein/DNA ratio is 800×g. (2)The 5α-reductase activity of the refined nuclear fraction was measured. 58% of the total activity was coarse nuclear fraction (800×g, sediment), 21% was refined nuclear fraction, and 27% was pure nuclear fraction. About 8% of the activity is recognized by the company. The activity of 5α-reductase is very high. The amount of DNA in the purified nuclear analysis is less than 20%, and the activity of 5α-reductase in the purified nuclear analysis is less than 20%. The difference between protein activity and protein purification is recognized. Compare them to the rest. The activity of 5α-reductase in the production of anti-inflammatory fatty gland is about 80%. The protein activity of the purified nuclear fraction is 15 times higher than that of the purified nuclear fraction. (3)The existence of two 5α-reductases (1.5×10^<-6>M and 3×10^<-5>M) in the presence of different Km values in the production process was demonstrated by the results obtained, and the Km values of the two enzymes were determined by the analysis and analysis of the H3-reductases from 0.07 to 50μM. In the middle of the picture, the saturation curve is changed, and the Km value is changed to 10^<-5>M.