ウシ歯髄細胞培養中に発現されるコラゲナ-ゼインヒビタ-の遺伝子の研究

牛牙髓细胞培养中胶原酶抑制基因表达的研究

• 批准号: 01571033
• 负责人: 深澤 加與子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Matsumoto Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01571033/
• 关键词: コラゲナ-ゼインヒビタ-(TIMP); ウシ歯髄細胞; cDNA

1.実験方法(1)培養条件の検討:ウシ末萌出歯髄細胞を10%FBSを含むMEM培地で増殖レコンフルエントした後、(A)-FBS/MEM)(B)12-O-Tetradecanoyl-Phorbol-13Acetaye(TPA)60ng/mlを含むMEM培地に換え、培地中のコラゲナ-ゼインヒビタ-(C.I.)量を抗原抗体反応で測定する。(2)TPA含有培地で培養した細胞のmRNAを抽出し、cDNAライブラリ-(λgtll)を作る。(3)C.I.ポリクロナ-ル抗血清でライブラリ-をスクリ-ニングし、クロ-ンを取り出し、挿入されたDNAのサイズの測定ならびにDNAの精製。またタンパク質を発現させ、ライセ-トの性質を同定した。(4)ダイデオキシチェ-ン法により塩基配列を決定し、ヒトC.I.cDNAの塩基配列との比較をする。2.結果(1)TPA処理により高発現条件下でcDNAライブラリ-を作成できた。(2)ポリクロナ-ル抗血清によるスクリニングで、10^3個に数個の陽性プラ-クを得た。(3)10種のクロ-ンを取り出した。挿入DNAサイズは400〜1100塩基であった。タンパク発現ライセ-トはどのクロ-ンもC.I.活性を示さずモノクロナ-ル抗体とも反応はしなかった。(4)塩基配列の決定によりクロ-ン間に相同性が無かったが、ヒトC.I.cDNAの塩基配列との比較により、1つのクロ-ンがC末端側アミノ酸90をコ-ドする塩基配列を含むと予想された。3.考察ならびに今後の計画cDNAの1部を含むクロ-ンDANをプロ-ブとして、ライブラリ-をスクリニングし、全cDANを含むクロ-ンを取り出す。

1. Be 験 method (1) culture conditions の beg: 検 ウ シ 歯 eruption at the end of the marrow cell を 10% FBS を containing む MEM petty で raised colonization レ コ ン フ ル エ ン ト し た, (A) - after FBS/MEM) (B) 12 - O - Tetradecanoyl - Phorbol - 13 acetaye 60 ng/ml を (TPA) Contain む MEM petty に in え, cultivated land in の コ ラ ゲ ナ - ゼ イ ン ヒ ビ タ - (ci) quantity を antigen antibody against 応 で determination す る. (2)TPA was used to cultivate で cells with a substrate, <s:1> mRNAを was extracted, and <s:1> and cDNAラ ラ ブラリ-(λgtll)を were extracted for る. (3) the C.I. ポ リ ク ロ ナ - ル antiserum で ラ イ ブ ラ リ - を ス ク リ - ニ ン グ し, ク ロ - ン を take り し, scions into さ れ た DNA の サ イ ズ の determination な ら び に DNA の refined. ま た タ ン パ ク qualitative を 発 now さ せ, ラ イ セ - ト の nature を with fixed し た. (4)ダ デ デ キシチェ -<e:1> method によ <s:1> base coordination を determines the ヒト and ヒト c.i.c-dna <s:1> base coordination と <s:1> comparison をする. 2. Result (1)TPA processing of でcDNAラ ブラリ-を under the condition of high occurrence of によ で was produced as で た た た. (2) ポ リ ク ロ ナ - ル antiserum に よ る ス ク リ ニ ン グ で, 10 ^ 3 に several の positive プ ラ ク - を た. (3) For 10 kinds of ロ ロ- を を, take the ロ to get the た. Insert DNAサ ズ ズ ズ 400 to 1100 base であった. タ ン パ ク 発 now ラ イ セ - ト は ど の ク ロ - ン を も ci activity in さ ず モ ノ ク ロ ナ ル antibody と も anti 応 は し な か っ た. (4) salt with column の decided に よ り ク ロ - ン に phase between same-sex が no か っ た が, ヒ ト C.I.C DNA の salt base with column と の is に よ り, 1 つ の ク ロ - ン が C terminal side ア ミ ノ acid 90 を コ - ド す る salt base with column を containing む と to think さ れ た. 3. Inspection な ら び に の projects in the future cDNA の contains 1 department を む ク ロ - ン DAN を プ ロ - ブ と し て, ラ イ ブ ラ リ - を ス ク リ ニ ン グ し, whole cDAN を containing む ク ロ - ン を take り す.