レトロウィルスで癌化した細胞におけるエピジェネティックな変化

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ラット線維芽細胞3Ylをラウス肉腫ウィルス(RSV)でトランスホ-ムしたH21細胞からは、比較的容易にリバ-タントが分離でき,そこからまた再トランスホ-マントが分離できる。ノ-ザンブロットでRSVの転写物を調べると,リバ-タントでは全て検出レベル以下にシャットオフされている。トランスホ-マントでは,RSVで本来予測されるmRNA(38S,28S,21S)以外に18S,15Sの異常に小さいRSV由来の転写物が認められる。この異常なサイズのmRNAの起源とH21におけるRSVの転写調節機構を明らかにするためにクロ-ン化したプロウィルスを調べたところ,H21には1本の完全なゲノムと欠損型のゲノムが存在し、異常なサイズのmRNAは欠損型に由来する。即ち、調べた限りのH21の亜株では,染色体上の別の場所に存在する2つのRSV分子の転写のON,OFFが同期している。欠損型ウィルスは,src遺伝子の極く一部のみを持つだけなので細胞のトランスホ-メ-ションは完全型のプロウィルスからのsrc遺伝子発現による。クロ-ン化した種々の断片を用いてトランスホ-マント,リバ-タントのDNAのメチル化をサザンブロットで比較したところ,プロウィルスより上流の細胞のDNAや,pol,env,srcといったウィルス中央部ではほとんど差が認められないが5'及び3'LTR周辺のメチル化の程度がリバ-タントで高い。MspIで切断し,LTRをプロ-ブとして用いたサザンブロットで,約1.2kbのバンドがリバ-タントに特異的であったが、これは完全型プロウィルスの5'LTRU5内部のMspI切断部位のメチル化によることが分った。一方、RSVプロウィルスを約10コピ-持つXC細胞からも、形態的に異なる細胞が分離でき、それらの間でRSVの転写量が異なる。この場合も、転写量の多い株で,LTRのメチル化が低くなっていた。