小分子RNAによる癌化機構に関する解析

小RNA致癌变机制分析

• 批准号: 02152078
• 负责人: 濱田 勝友
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02152078/
• 关键词: U5 RNA; clastogenic activity; chromosome aberration; cell transformation

核内小分子U5 RNA(U5)のcDNAfragmentを3個に分解し化学合成を行ない、それぞれをpGEM3 vectorに挿入後、in vitro transcriptionを行なった。各々のtranscript 3Y1細胞にtransfectし、染色体異常誘発能を検討した。U5の二次構造におけるfirst stemの3'側後半部分にその活性を認めた。誘発された染色体異常はchromatid typeのgap、break及びexchangeであった。 ^3Hラベルした当部分RNAのtransfectionにより、誘発されたgap領域に一致して銀粒子が認められた。DNAreplicationを通して、宿主DNAと当部分RNAの結合が示唆された。一方では、expression vector、pSVneoHMTIIに挿入し、細胞内でのRNA発現を行なった。vector導入の一定期間の後、細胞のmorphological transformationを観察した。形質転換細胞は高率に染色体異常を有した。RNA塩基配列自体に染色体異常誘発能の責任があると考えられ、3'側後半部分を構成するpurine ribonucleotide stretch、5'GGAGAGGAA 3'がその活性部分であると判断された。in vitro transcription系を用いて、purine oligoribonucleotideはmetalーion catalyzed cleavageに高感受性であることが示された。このreactionにより、切断部分においてAdenosine及びGuanosine 2',3'ーcyclic phosphateが生成された。【考察】以上の成績より、U5の部分RNAは細胞内で宿主DNAとbandし、selfーcleavageによりDNA elongationを遅延ないし阻止するものと考えられる。

The cDNAfragment of U5 RNA(U5) in the nucleus is decomposed into three parts and chemically synthesized into three parts. Transfect and chromosome abnormality induction in each transcript 3Y1 cell line were investigated. The secondary structure of U5 is the first stem and the third half of the stem is the second stem. Chromosome abnormalities are induced by gap, break and exchange. When part of the RNA is transferred, the gap is formed and silver particles are recognized. DNA replication is mediated by binding of host DNA and partial RNA. The expression vector, pSVneoHMTII, and RNA expression in a cell After a certain period of vector introduction, morphological transformation of cells is observed. Chromosome abnormalities occur at a high rate in morphologically altered cells. RNA base alignment is responsible for the induction of chromosomal abnormalities in the 3'posterior half of the purine ribotide stretch, 5' GGAGGAA 3'and the active part of the 3' chromosome. In vitro transcription system, purine oligonucleotide is used to catalyze cleavage. The reaction is to produce Adenosine and Guanosine 2',3'-cyclic phosphate. [Investigation] Some of the RNA in U5 was isolated from host DNA in the cell.

项目成果

Hamada,K.,et al.: "Mechanisms of chromosome aberration induced by RNA"

Hamada,K.,et al.：“RNA 诱导染色体畸变的机制”