放射線照射正常細胞に於ける形質転換能を有するNon-codingRNA分子の探索

寻找在受辐射的正常细胞中具有转化能力的非编码RNA分子

• 批准号: 08878125
• 负责人: 濱田 勝友
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878125/
• 关键词: Transforming RNA; 形質転換; 分泌蛋白; Polypurine配列; リボゾーム; シグナル認識粒子; U5 RNA; transforming RNA; 放射線照射細胞; polypurine sequence; in vitro transformation; ^<60>Co; human diploid cells; Alu配列

TransformingRNAの発見poly(A)tail付加RNA(GAUUUCCGUGGAGAGGAACAACUCUGAGU)はRNA polymerase II依存性発現により正常ラット繊維芽細胞を高頻度に形質転換する。活性はpolypurine GGAGAGGAA配列に依存した。形質転換細胞は継代により二次的形態変化,足場非依存性及び腫瘤形成能を獲得した。またこのRNAはin vivoで細胞外基質蛋白fibronectin合成を翻訳レベルで抑制した。RNA pol II-dependentnon-coding transcriptがtransforming agentになることが明らかとなった。TransformingRNA(TR)の分泌蛋白合成への関与TRの蛋白合成に与える影響をin vitro reticulocyte lysate systemで検討した。分泌蛋白としてpreβ-lactamase,非分泌蛋白としてluciferaseをモデルとして用いた。TRはpSP64(polyA)に挿入したcDNAからSP6 RNA polymeraseを用いて作成した。上記両蛋白合成系にcap及びpoly(A)tail構造をもつTRを加えるとpreβ-lactamase合成の抑制が認められた。更にoligo(GGAGAGGAA)を用いて追試した。oligoによりpreβ-lactamase合成抑制が認められた。3S-9ntは分泌シグナルを有する蛋白合成の初期化に影響を与えないが伸長を阻害した。0ligoはリボゾーム内の28S rRNAとantisense oligo(TTCCTCTCC)はシグナル認識粒子(SRP)内の7SL RNAと相補的に結合できることから分泌蛋白合成における両RNAの生理的協調作用をGGAGAGGAAが障害していると考えられた。この成績を基にヒト細胞からTR候補転写物の検出を行い正常ヒト細胞の不死化能について検討を行っている。

Transforming RNA development poly(A)tail plus RNA(GAUUCCGUGGAGGACAACUGAGU) RNA polymerase II-dependent development is a high frequency of morphological changes in normal cells. Activity depends on polypurine GGAGGAA alignment. Morphological changes in cells are secondary to morphological changes, field independence and tumor formation. The RNA gene inhibits the synthesis of extracellular matrix protein fibronectin in vivo. RNA pol II-dependentnon-coding transcript transformation agent Transforming RNA (TR) secretion protein synthesis and TR protein synthesis in vitro reticulocyte lysate system Secreted protein is pre-lactamase, non-secreted protein is pre-lactamase, and non-secreted protein is pre-lactamase. TR pSP64 (polyA) cDNA was inserted and SP6 RNA polymerase was produced. The above mentioned protein synthesis system is cap and poly(A)tail structure, TR is added, and β-lactamase synthesis is inhibited. More oligo(GGAGGAA) oligo preβ-lactamase synthesis inhibition 3S-9nt secretion has an effect on protein synthesis in the early stages and prevents elongation. 0ligo: 28S rRNA and antisense oligo(TTCCTCC): 7SL RNA and complementary RNA in SRP: GGAGGAA The results of this study are based on the detection of TR candidate substances in normal cells and the detection of immortal energy in normal cells.

项目成果

濱田勝友: "Morphological transformation caused by a partial sequence of U5 small nuclear RNA" Molecular carcinogenesis. 20. 175-188 (1997)

Katsutomo Hamada：“U5 小核 RNA 的部分序列引起的形态转变”分子癌变。 20. 175-188 (1997)

Katsutomo Hamada: "Morphological transformation caused by a gential sequence of US small under RNA" Molecular carcinogenesis. 20. 175-188 (1997)

Katsutomo Hamada：“由美国小RNA基因序列引起的形态转变”分子癌变。

K.Hamada et al.: "Effect of transforming RNA on the symthesis of a protein with a secretory signal sequence in vitro" Journal of Biological Chemistry. in press.

K.Hamada 等人：“转化 RNA 对体外合成具有分泌信号序列的蛋白质的影响”《生物化学杂志》。