ヒト肝特異抗原の酵素免疫測定法による損傷臓器の識別同定

使用酶联免疫吸附测定人类肝脏特异性抗原来鉴定受损器官

• 批准号: 02807067
• 负责人: 高浜 桂一
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02807067/
• 关键词: Liver Specific Antigen(LSA); SandwichーELISA; 肝損傷

本年度末までの研究実績は以下の通りである。1.肝特異抗原の精製について肝特異抗原は、ヒト肝水溶性分画よりゲルろ過、塩析、イオン交換クロマトグラフィ-等の手技を用いて精製した。精製後の特異抗原の性状は、SDS電気泳動法により分子量5万2千、等電点電気泳動法により等電点5.8〜5.9のPolymericな蛋白であることが示された(LSA=Liver Specific Antigen)。2.肝特異抗体とその臓器特異性について精製したLSAを抗原として、Rabbit Antiーhuman LSA抗体を作製した。この抗体をヒト腎抽出蛋白で吸収後、DptーELISAにより、ヒト脳、心、肺腎、膵、脾、骨格筋抽出蛋白及び血清に対してその特異性を検討したところ、これらの諸臓器とは全く反応せず、この抗体の肝特異性が示された。また、モルモット、ラット、マウス肝抽出蛋白との間で種族等異性についても検討した結果、これらの各種肝抽出蛋白とも反応性が認められず、Antiーhuman LAS抗体のヒト特異性も示唆された。3.SandwichーELISA測定系の開発上述の抗体をFab'に調整後ペルオキシダ-ゼにより標識し、Antiーhuman LSA Fab'ーHRP Conjugateを作製した。抗原のトラップにはAntiーhuman LSAを固相に不溶化し、常法に従って検量線を作製した。その結果、LSA濃度で3fmol〜100fmol/tubeの範囲で抗原の定量が可能であった。これは、DotーELISAに比し約130倍感度が上昇したことになる。現在、この測定系を用いて肝に損傷を生じていた剖検例の血中から、LSAの定量を試ている。

The results of the research at the end of the year are as follows: 1. The purification of liver specific antigen is carried out by means of techniques such as purification of liver specific antigen, analysis of liver water solubility, and exchange of proteins. After purification, the specific antigen was characterized by SDS electrophoresis, molecular weight 52,000, isoelectric point electrophoresis, isoelectric point 5.8 ~ 5.9 and Polymeric protein (LSA=Liver Specific Antigen). 2. Liver specific antibodies and organ specificity are refined to LSA antigen and Rabbit Anti-human LSA antibodies are produced. The specificity of these antibodies was investigated by ELISA for kidney extract protein, liver extract protein, lung extract protein, spleen extract protein and serum. The results of the study showed that there was a racial heterogeneity among the various liver extract proteins, and the anti-human LAS antibody specificity was detected. 3. Sandwich ELISA assay was developed to adjust the antibody Fab's identity and to control the Anti human Fab's HRP Conjugate. The antigen is prepared by insolubilizing Anti-human LSA in the solid phase and using conventional methods. Results: LSA concentrations ranged from 3 fmol to 100fmol/tube, and antigen quantification was possible. The dot ELISA is about 130 degrees higher. Now, this assay is used to detect liver damage, analyze blood samples, and quantify LSA.

项目成果

Yasuhisa Seo et al: "A Liver Specific AntigenーIts Isolation and Characterization from Human Liver" Clinical Experimental Immunology.

Yasuhisa Seo 等人：“肝脏特异性抗原 - 从人肝脏中分离和表征”临床实验免疫学。