むち打ち症の免疫学的判定法に関する研究

本年度までの研究実績は以下の通りである。1.抗アクチン抗体を用いた頸部筋損傷の組織学的検討交通外傷による司法解剖例から頸部筋肉を採取し、パラフィン切片作製後、抗アクチン抗体を用いたABC法によって免疫組織学的に筋繊維の損傷の程度を検討したところ、筋肉内に出血の認められた損傷群においては、筋繊維の断裂及び走行異常が多数認められた。次いで家兎の頸部筋肉に、実験的に20〜120Gの外力を作用させ外力によって生じる筋の一次的損傷を、同様に組織学的に検討した。その結果、40G以下の負荷群では、筋繊維に異常を認めなかったが、筋の断裂する40G以上の負荷群においては、筋の断端部で横紋の消失、硝子様変化が認められ、同時に筋繊維の断裂が認められた。2.筋形質膜蛋白Dystrophinの精製Dystrophinの精製は以下の様に行った。先ず、牛骨格筋を10%SDSで可溶化後、ウルトロゲルAcA22でゲルろ過を行い、M.W.230kd以上の蛋白を含む分画を得た。同時に、DMD疾患モデルmdxマウス骨格筋を同様に処理した後、4ー15%SDSーPAGEを用いて両者を比較し、Dystrophinのバンドの同定を行った。その結果、DystrophinはM.W.400kd前後のSinglバンドであると思われた。次いで、4%SDSーPAGEにより、牛骨格筋ゲルろ過分画からDystrophinを電気的に抽出した。現在、精製したDystrophinを免疫して、抗体を作製中である。

本年度までの研究実績は以下の通りである。1.抗アクチン抗体を用いた頸部筋損傷の組織学的検討交通外傷による司法解剖例から頸部筋肉を採取し、パラフィン切片作製後、抗アクチン抗体を用いたABC法によって免疫組織学的に筋繊維の損傷の程度を検討したところ、筋肉内に出血の認められた損傷群においては、筋繊維の断裂及び走行異常が多数認められた。次いで家兎の頸部筋肉に、実験的に20〜120Gの外力を作用させ外力によって生じる筋の一次的損傷を、同様に組織学的に検討した。その結果、40G以下の負荷群では、筋繊維に異常を認めなかったが、筋の断裂する40G以上の負荷群においては、筋の断端部で横紋の消失、硝子様変化が認められ、同時に筋繊維の断裂が認められた。2.筋形質膜蛋白Dystrophinの精製Dystrophinの精製は以下の様に行った。先ず、牛骨格筋を10%SDSで可溶化後、ウルトロゲルAcA22でゲルろ過を行い、M.W.230kd以上の蛋白を含む分画を得た。同時に、DMD疾患モデルmdxマウス骨格筋を同様に処理した後、4ー15%SDSーPAGEを用いて両者を比較し、Dystrophinのバンドの同定を行った。その結果、DystrophinはM.W.400kd前後のSinglバンドであると思われた。次いで、4%SDSーPAGEにより、牛骨格筋ゲルろ過分画からDystrophinを電気的に抽出した。現在、精製したDystrophinを免疫して、抗体を作製中である。