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カイコ貯蔵タンパク質遺伝子における cisー発現調節領域の解析

家蚕贮藏蛋白基因顺式表达调控区分析

基本信息

批准号：
02640560
负责人：
泉進
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カイコには貯蔵タンパク質SP1,SP2という2種類の体液タンパク質が存在する。これらのタンパク質遺伝子の発現を調節していると考えられるcisー領域について無細胞転写系,ゲルシフト法,およびDNaseフットプリント法により解析した。カイコ卵巣由来の培養細胞BmNより調節した無細胞転写系を用いて,各種欠損SP1遺伝子の発現様式を解析したところ,SP1の基本的転写にはTATA box,TATATATA,を含む-44から+16の領域が重要であることが判明した。特にTATA boxは「TA」の4回の繰り返しから構成されているが、この繰り返しを3回にすることにより転写活性は90%以上失なわれた。以上の結果よりSP1遺伝子の転写にはTATA boxの構造または位置が重要な役割を果しているということが判明した。2種の貯蔵タンパク質遺伝子の構造を比較すると-90から-70にかけて約70%の相同性がある。この領域が貯蔵タンパク質遺伝子の発現に関与するのではないかと考え,この部分を含むDNAフラグメントを調製し,ゲルシフト解析を行った。貯蔵タンパク質が活発に合成されている5齢2日目の脂肪体から核を調製し,この核から核タンバク質を抽出した。核抽出液とDNAフラグメントを反応させゲルシフトを行うと,確かにこの領域にタンパク質が結合することが判明した。この結合にはSP1に対してはSP2の,逆にSP2に対してはSP1のフラグメントにより阻害がかかる。さらにDNaseフットプリント法により確かにこの領域にタンパク質が結合していることが明らかとなった。以上の結果よりカイコ貯蔵タンパク質遺伝子上流に共通に存在する配列がこれらの遺伝子の転写を調節している可能性が示唆された。今後,この領域に結合するタンパク質が実際に転写因子として機能しいてるか否かについて,現在開発中のカイコ脂肪体無細胞転写系を用いて解析する予定である。

SP1,SP2, SP3, SP4, SP5, SP6, SP7, SP8, SP8, SP9, SP10, SP10, SP11, SP12, SP11, SP11, SP12, SP10, SP11, SP11, SP12, SP12, SP11, SP12, SP11, SP12, SP The expression of these proteins is regulated by the cell-free system, and by the DNase method. The expression of SP1 gene was analyzed by using cell-free transcription system, and the basic transcription of SP1 gene was identified by TATA box, TATATA box, and +16 domain. In particular, TATA box "TA" 4-loop composition,"TA" 3-loop composition,"TA" 4-loop composition,"TA" 3-loop composition,"4-loop composition," TA "3-loop composition," 3-loop composition,"TA" 3-loop composition,"3-loop composition," 4-loop composition,"TA" 3-loop composition,"3-loop composition," 4-loop composition,"4-loop composition," TA "3-loop composition," 3-loop composition,"3-loop The above results show that the structure and position of TATA box are very important. The structural comparison of the two species of reservoir material is from-90 to-70, and the similarity is about 70%. This domain contains DNA fragments that are modulated and analyzed in relation to the discovery of DNA fragments. On the 5th and 2nd day of the storage period, the fat body was activated and the nucleus was extracted The DNA extract was determined by the binding of the DNA extract to the DNA. The combination is SP1, SP2, SP3, SP4, SP5, SP6, SP7, SP8, SP9, SP This is the first time I've ever seen a person who's been in this world. The above results indicate the possibility of common distribution and modulation of the gene upstream. In the future, the combination of this domain and the quality of the writing factor will be determined. Now, the development of the fat cell-free writing system will be determined.