カイコ脂肪体を用いた組織特異的転写糸の確立
利用蚕脂肪垫建立组织特异性转录线
基本信息
- 批准号:03640612
- 负责人:
- 金额:$ 1.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
- 财政年份:1991
- 资助国家:日本
- 起止时间:1991 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
昆虫の脂肪体は脊椎動物の肝臓と脂肪組織の機能を合せ持つ組織であり各種酵素および体液タンパク質を発生段階特異的かつ性特異的に活発に合成している。本研究は脂肪体における遺伝子発現の調節機構を解析することを目的とし,カイコ脂肪体細胞核から組織特異的無細胞転写系を確立することに重点を置いた。以下にその結果について述べる。雌の5齢2日目のカイコ幼虫から脂肪体を摘出し,ホモゲナイズバッファ-の浸透圧,塩組成,界面活性剤の有無等の条件について検討を加えた。その結果,最も効率良く核が分離できる方法は次のとうりであることが判明した。まず脂肪体をMg^<2+>を含むバッファ-中に放置し,細胞を十分膨張させた後テフロンーガラスホモゲナイザ-を用いて0.1%トライトン存在下でホモゲナイズする。このホモゲネ-トをステンレスメッシュを使いろ過した後,低速で遠心し粗核分画を得た。このようにして分画した核をエチジウムブロミドで染色した後螢光顕微鏡で観察すると他の方法により分画した核に比べ,核表面に付着している脂肪顆粒がきれいに除去されていることが明らかとなった。この粗核分画より核タンパク質を0.4M NaClで抽出し,無細胞転写系を調製した。この転写系により,カイコ貯蔵タンパク質SPIの遺伝子の転写を試みた。コントロ-ルとして培養細胞B_<n1>Nより調製した転写系を用いた。脂肪体核転写系はSPI遺伝子を忠実にしかも効率良く転写することが明らかとなった。この転写系を用いることにより、今後遺伝子の転写を制御するシスコントロ-ル領域を検索することが可能になったと考えられる。またトランス作用因子もこの核抽出液より分離可能であろう。
The fat bodies of insects combine the functions of vertebrate liver and subcutaneous fat to maintain the synthesis of enzymes and body fluids. This study focuses on the analysis of regulatory mechanisms for adipocyte gene expression and the establishment of a tissue-specific cell-free transcription system for adipocyte nuclei. The following results are described below. Female 5 2 As a result, the best rate of separation is the method of separation. When the fat body is placed in the middle of the cell containing Mg^<2+>, the cell expands greatly. In this case, the distance between the center and the center is small. The method of fluorescence microscopy was used to detect fat particles on the surface of the nucleus. The rough nuclear analysis was performed in 0.4M NaCl solution, and the cell-free system was modulated. This is the first time I've ever seen a woman who's been in a relationship with a woman. The cell culture system was developed by using the cell culture medium<n1>. The fat core is composed of SPI gene, which is the most important part of fat core. This is the first time that a person has ever been involved in a relationship with another person, and the first time that a person has ever been involved in a relationship with another person. The nuclear extract can be separated by a factor of action.
项目成果
期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
伊藤 雅信: "Cloning and sequence analysis of membrane bound alkaline phosphatase cDNA of the silkworm,Bombyx mori" Biochim.Biophys、Acta. 1129. 135-138 (1991)
Masanobu Ito:“家蚕膜结合碱性磷酸酶 cDNA 的克隆和序列分析”Biochim.Biophys,Acta.1129.135-138(1991)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
中藤 博志: "Structure and expression of gene coding for a pupal cuticle protein of Bombyx mori." Biochim.Biophys.Acta.
Hiroshi Nakato:“家蚕蛹角质层蛋白编码基因的结构和表达。”
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
森 茂俊: "Structures and organization of genes for major plasma proteins of Bombyx mori" J.Mol.Biol.218. 7-12 (1991)
Shigetoshi Mori:“家蚕主要血浆蛋白基因的结构和组织”J.Mol.Biol.218(1991)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
森 茂俊: "Complete nucleotide sequence of major plasma protein genes of Bombyx mori" Biochim.Biophys.Acta. 1090. 129-132 (1991)
Shigetoshi Mori:“家蚕主要血浆蛋白基因的完整核苷酸序列”Biochim.Biophys.Acta.1090.129-132(1991)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
安居院 宣昭: "Hormonal control of vitellogenin mRNA level in the male and female housefly,Musca domestica." J.Insect Physiol.37. 383-390 (1991)
Nobuaki Angoin:“雄性和雌性家蝇中卵黄蛋白原 mRNA 水平的激素控制。J.Insect Physiol.37(1991)。”
- DOI:
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泉 進其他文献
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