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細胞移植法によるカイコの形質転換個体の作出と利用

细胞移植法转化蚕的生产与利用

基本信息

批准号：
02556008
负责人：
小林正彦
金额：
$ 9.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至 1992
项目状态：
已结题

项目摘要

1.精細胞の移植について、飼育条件による有核精子と無核精子の割合の変化を調べた。その結果、低温暗催青した非休眠性幼虫では無核精子の割合が休眠性幼虫に比べて多いことが明らかになり、現在使用しているB系統に二化性の遺伝子を導入し低温暗催青することにより、より効率のよいドニーの系統をえられることが判明した。2.カイコの分散型反復配列BMCI多重遺伝子族をベクターとし、クロラムフェニコールアセチル化酵素遺伝子をマーカーとし、熱ショック蛋白質遺伝子のプロモーターをもつプラスミドpBmhscatを構築し、カイコの培養細胞にリン酸カルシュウム共沈法により導入した。その結果、比較的効率よくゲノムDNAと組換えを起こしていることが明らかになった。これを精細胞に応用し、組換え精細胞および組換え体カイコが得られる高い可能性が示唆された。3.カイコの前胸腺刺激ホルモン遺伝子と休眠ホルモン-PBAN遺伝子について多型を検索し、それぞれ遺伝子座位を決定した。カイコの前胸腺刺激ホルモン遺伝子は第22連関群の2.7に占座し、精細胞移植法によりホモ致死個体が救出されたskuと同一の連関に属し、移植の指標に使えることが明かになった。4.異種間細胞の移植のため、エリサンの精巣をカイコに移植し移植適性を調べた。その結果、移植された精巣は体液中では消化されるが、精細胞の移植では細胞が健在であることが明らかになった。5.種間雑種を作り出すため、カイコの培用細胞とマウスの培養細胞の融合条件を検索した。その結果、400v/cmの至適の条件では効率よく融合細胞が得られることが明らかになった。6.遺伝子導入と細胞融合に用る電気細胞穿孔法の精原細胞への影響を調べた結果、300v/cm以下では精細胞まで分化し移植が可能であった。

1. Sperm cell transplantation, culture conditions, nucleated sperm and non-nucleated sperm cleavage and transformation. As a result, the low temperature dark incubation of non-dormant larvae, the cleavage of non-nucleated sperm, the dormancy of larvae, and the use of B system, the introduction of binary sperm, and the low temperature dark incubation of non-dormant larvae, and the use of B system, and the identification of the rate of non-dormant larvae. 2. BMCI multiple gene family with dispersed type repeated alignment is introduced into cultured cells by co-precipitation method. The results of the comparison are as follows: The sperm cells are used, and the sperm cells are used. 3. Pre-thymic stimulation, gene transfer, dormancy, and PBAN gene polymorphism. The 2.7 th position of the 22nd linkage group was occupied by the sperm cell transplantation method, and the lethal individual was rescued from the same linkage group. 4. Transplantation of heterogeneic cells is regulated by the regulation of transplantation suitability. The result of transplantation is that the sperm cells are digested in the body fluid, and the sperm cells are transplanted in the body fluid. 5. The fusion conditions of cultured cells were investigated. As a result, 400v/cm and the appropriate conditions, the fusion rate of cells was obtained. 6. The results showed that sperm cell differentiation was possible under 300v/cm when sperm cells were introduced into cells and fused by electric cell perforation.