木をかたちづくる遺伝子のクロ-ニングと解析

形成树木的基因的克隆和分析

• 批准号: 02660175
• 负责人: 黒田 宏之
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02660175/
• 关键词: 樹幹特異的; 遺伝子発現; RNA抽出; レクチン; クロ-ニング

樹幹のmRNAを変質させないで天然状態のまま取り出すことは、樹幹特異的に発現する遺伝子群を明かにし、人為的な遺伝子発現調節を行なうために非常に重要な事項である。しかし、従来使われている抽出方法では変質の少ないRNAを得ることはできなかった。本研究では、樹幹から調製したRNAの性質を詳細に検定することによって、樹幹RNAの抽出方法を評価した。その結果、1.液体窒素中での磨砕による温度上昇抑制、2.低温・グアニジウム塩抽出による高いRNase活性の抑制、3.グアニジウム塩抽出に由来する不純物除去などに配慮した結果、次の点で満足できる品質のRNAが得られた。全RNA標品では、1.不純物混入のないUVスペクトル、2.リボソ-ムRNAが分解されず存在、3.RNaseの完全な除去、4.RNase処理によるRNAバンドの存在などが確認され、ポリ(A) ^+RNAからは5.効率よいcDNA合成ができた。次にこのライブラリ-から特定の遺伝子をクロ-ニングする目的で発現量の大きなレクチン遺伝子に着目した。調製したライブラリ-には少量DNAが混入している恐れがあったので、プライマ-を設定・合成し、PCRによるダイレクトクロ-ニングを試みた。現在、PCR生成物の塩基配列を決定中である。最終的結論は塩基配列の結果を待たねばならないが、本研究は、樹幹RNAの抽出・クロ-ニング・解析に関する方法論に新しい路を開いたものであると確信する。今後デ-タの補完を計り、方法論の普遍性を検討するとともに、得られたライブラリ-からアンチセンスDNAを調製し、樹木の形質転換を計るなどによって「木をかたちづくる遺伝子」の本質に迫りたい。

Trunk-specific mRNA expression is a very important event in the regulation of gene expression. The method of extracting RNA from the sample is very simple. In this study, the properties of stem RNA were determined in detail, and the methods of stem RNA extraction were evaluated. Results: 1. Inhibition of temperature rise in liquid phase; 2. Inhibition of high RNase activity in low temperature phase extraction; 3. Impurity removal from phase extraction; 3. Preparation of RNA; 4. Quality of RNA obtained. Total RNA standard: 1. Impurity mixed in UV detection; 2. RNA decomposed without presence; 3. RNase completely removed; 4. RNA decomposed without presence during RNase treatment; 5. Efficient cDNA synthesis. The next step is to create a large number of unique messages. A small amount of DNA is mixed in, and the PCR is set to synthesize. Now, PCR products and nucleotide alignment is determined. The final conclusion is that the results of gene alignment are pending. This study is based on a new methodology for stem RNA extraction and analysis. In the future, the completion of the study, the universality of the methodology, and the nature of the tree transformation study will be discussed.