三重免疫電顕法によるTRHニュ-ロンのNPY・カテコ-ルアミン共存性神経支配

三重免疫电子显微镜观察 NPY/儿茶酚胺共存 TRH 神经元的神经支配

• 批准号: 02670029
• 负责人: 塩田 清二
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670029/
• 关键词: 免疫電顕; TRHニュ-ロン; ニュ-ロペプチドY; カテコ-ルアミン; 神経支配

ラット視床下部室傍核のTRHニュ-ロンのカテコ-ルアミン(CA)性およびニュ-ロペプチドY(NPY)性神経支配ならびに、CA・NPY共存性神経支配を調べるために、NPYならびCA合成酵素であるtyroーsine hydroxylase(TH),dopamineーβーhydroxylase(DBH),phenylethanolamineーNーmethyltransferーase(PNMT)抗体を用いて、三重免疫電顕法によって観察した。Wistar系雄ラットを用いて潅流固定後ビブラト-ム切片を作成し、NPY抗体を用いてPAP法とTH、DBH、PNMT抗体を用いてビオチン化二次抗体ーフェリチンアビジン法による包理前二重免疫染色を行ない、オスミウム酸後固定後樹脂に包理した。超薄切片上でTRH抗体と金コロイド標識二次抗体を用いて免疫染色し、電顕的に観察した。まず、二重免疫電顕法にて室傍核内のCAとNPYの共存終末を観察した結果、NPY免疫陽性を示すPAP反応産物は終末内の小型の暗調果粒にみられ、TH,DBHおよびPNMT反応陽性を示すフェリチン粒子は主に基質内に散在性にみられた。三重免疫電顕法にて観察した結果、金粒子で標識された小型のTRH免疫陽性果粒を有するニュ-ロンに、TH,DBH,PNMTあるいはNPY陽性終末がそれぞれシナプス形成している像、さらにTH,DBHあるいはPNMTとNPYの共存終末のシナプス形成像が観察された。以上の結果から、室傍核のTRH含有ニュ-ロンにシナプス形成しているCAニュ-ロンの一部にNPYを含むものもあることがわかった。この結果は、第95回日本解剖学会総会(1990、東京)にて発表した。また、同様の手技を用いてオキシトシン含有ニュ-ロンへのCA・NPY共存ニュ-ロンの神経支配についての結果も第3回日米組織細胞化学会(1990、シアトル市)にて発表した。

TRH-1, TRH-1, TRH-1, After the Wistar male was fixed with medium flow, the sections were prepared, and the NPY antibodies were prepared with medium flow PAP method, TH method, DBH method and PNMT method. The secondary antibodies were prepared with medium flow PAP method, TH method and PNMT method. TRH antibodies and gold staining were used to identify secondary antibodies on ultra-thin sections. The results of double immunoelectrochemistry showed that CA and NPY were present in the nucleus and that PAP products were present in the nucleus and small dark particles were present in the matrix. The results of triple immunoelectrochromatography showed that gold particles were identified in small TRH immunopositive fruit particles, and NPY positive terminals in TH,DBH,PNMT were detected in NPY positive terminals in TH,DBH,PNMT. As a result, TRH in the vicinity of the nucleus contains NPY, which is part of NPY. The results were presented at the 95th Japan Anatomical Society Meeting (Tokyo, 1990). The results of the study on the control of the brain by CA·NPY blue shift with the same technique were reported by the third session of the American Society of Histocytochemistry (1990, Shanghai).

项目成果

Shida,S.: "Ultrastructural and immunocytochemical studies of the rat hypothalamoーneurohypoーphysial system processed by rapid freezing and freezeーsubstitution fixation." Proceedings of the XIIth International Congress for Electron Microscopy.San Francisco

Shida, S.：“通过快速冷冻和冷冻替代固定处理的大鼠下丘脑-神经垂体-生理系统的超微结构和免疫细胞化学研究。旧金山第十二届国际电子显微镜大会论文集”

Shioda,S.: "Electron microscopic studies of medullary synaptic inputs to vasopressinーcontaining neurons in the hypothalamic paraventricular nucleus." J.Electron Microscopy. 39. 501-507 (1990)

Shioda, S.：“下丘脑室旁核髓质突触输入的电子显微镜研究。”J.Electron Microscopy 39. 501-507 (1990)

塩田 清二: "視床下部TRHニュ-ロンのNPY・カテコ-ルアミン共存性神経支配" 解剖学雑誌. 65. 255 (1990)

Seiji Shiota：“下丘脑 TRH 神经元的 NPY/儿茶酚胺共同神经支配”解剖学杂志 65. 255 (1990)。

Shioda,S.: "NPYーcatecholaminergic innervation of oxytocin neurons in the rat hypothalamus by triple immunoーlabeling electron microscopy." J.Histochemistry & Cytochemistry. 38. 1075 (1990)

Shioda, S.：“通过三重免疫标记电子显微镜观察大鼠下丘脑催产素神经元的 NPY 儿茶酚胺神经支配。”J.组织化学与细胞化学 38. 1075 (1990)。

Takeda,F.: "Distribution and coーlocalization of Metーenkephalinーlike and mesotocinーlike immunoreactivity in the neural lobe of the pituitary of the frog." Neuroscience Letters. 119. 86-89 (1990)

Takeda, F.：“青蛙垂体神经叶中甲硫氨酸脑啡肽样和中产素样免疫反应性的分布和共定位。神经科学快报”119. 86-89 (1990)。