遺伝子工学を用いた脳内摂食調節ニューロンネットワーク解析法の開発

开发利用基因工程分析大脑中进食调节神经元网络的方法

• 批准号: 19659047
• 负责人: 塩田 清二
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659047/
• 关键词: 遺伝子工学; ガラニン様ペプチド; トランスジェニックマウス; 摂食調節; ニューロンネットワーク

本年度はGALP遺伝子転写調節領域の下流にCreリコンビナーゼとタモキシフェン受容体融合タンパク質cDNAを導入したDNAコンストラクトを用いたトランスジェニックマウスの作出を行った。トレーサーとなる蛍光タンパク質を細胞中に高発現させるためにCre-loxPシステムを用いた。これは蛍光タンパク質の発現が目的となる遺伝子のプロモーター活性に依存することなく、強力なプロモーター活性をもつCAGプロモーターによって転写調節をうけるので、トレーサーの発現量は顕著に増大した。GALP mRNA発現は、生後14日目以降に発現することが言われているが、発生期あるいは胎生期に発現するかどうかは不明である。成体におけるニューロンネットワークを可視化することを目的とするので、発生期や胎生期にはトレーサーとなる蛍光タンパク質の発現を抑制しておかなければならない。そこでタモキシフェン(エストロゲン誘導体)特異的に結合するエストロゲン変異受容体とCreリコンビナーゼとの融合タンパク質にすることで、タモキシフェンが結合するまではCreリコンビナーゼは活性化しないというメリットがあるので、時間的にCreリコンビナーゼの活性化を調節した。GALP遺伝子の転写調節領域がどこにあるのか不明なため、GALP遺伝子が導入されているBAC(バクテリア人工染色体)クローンを用いた。Cre-タモキシフェン受容体cDNAを、そのBACクローンに導入した。BACクローン内で相同組換えを起こさせ、組み換わった8ACを調製し、これを受精卵へのインジェクション用のサンプルとした。肥満研究で主に使われている系統であるC57BL/6Jの受精卵へDNAを注入してトランスジェニックマウスの作出に成功した。さらにこのマウスを用いてCreリコンビナーゼが認識するloxP配列導入トランスジェニックマウスの作出にも成功した。

This year は GALP heritage 伝 son planning, regulating field の obscene に Cre リ コ ン ビ ナ ー ゼ と タ モ キ シ フ ェ ン by let body fusion タ ン パ ク qualitative cDNA を import し た DNA コ ン ス ト ラ ク ト を with い た ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の line make を っ た. ト レ ー サ ー と な る 蛍 light タ ン パ ク に を cells high quality 発 now さ せ る た め に Cre - loxP シ ス テ ム を with い た. こ れ は 蛍 light タ ン パ ク qualitative の 発 が purpose now と な る posthumous son 伝 の プ ロ モ ー タ に ー activity dependent す る こ と な く, powerful な プ ロ モ ー タ ー active を も つ the CAG プ ロ モ ー タ ー に よ っ て planning write adjust を う け る の で, ト レ ー サ ー の 発 now quantity は 顕 に raised large し た. GALP mRNA 発 は now, after 14 orders to drop に 発 now す る こ と が said わ れ て い る が phase, 発 あ る い は TaiShengQi に 発 now す る か ど う か は unknown で あ る. Adult に お け る ニ ュ ー ロ ン ネ ッ ト ワ ー ク を visualization す る こ と を purpose と す る の で phase, 発 や TaiShengQi に は ト レ ー サ ー と な る 蛍 light タ ン パ ク qualitative の 発 now を inhibit し て お か な け れ ば な ら な い. そ こ で タ モ キ シ フ ェ ン (エ ス ト ロ ゲ ン inductor) specific に combining す る エ ス ト ロ ゲ ン - different from, let body と Cre リ コ ン ビ ナ ー ゼ と の fusion タ ン パ ク qualitative に す る こ と で, タ モ キ シ フ ェ ン が combining す る ま で は Cre リ コ ン ビ ナ ー ゼ は activeness し な い と い う メ リ ッ ト が あ る の で, time of に Cre リ Youdaoplaceholder0 コ ビナ ゼ ゼ ゼ <s:1> activation を regulation た た. Traces of GALP 伝 son の planning, regulating field が ど こ に あ る の か unknown な た め, GALP but 伝 が import さ れ て い る BAC (バ ク テ リ ア artificial chromosome) ク ロ ー ン を with い た. The Cre-タモキシフェ <e:1> receptor cDNAを and そ <s:1> BAC ロ ロ <s:1> に に に are introduced into た た. BAC ク ロ ー ン で within the same group in え を up こ さ せ, group み in わ っ た 8 ac を し modulation, こ れ を fertilized egg へ の イ ン ジ ェ ク シ ョ ン with の サ ン プ ル と し た. Fat against research で に Lord make わ れ て い る system で あ る C57BL / 6 j の fertilized egg へ DNA を into し て ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の make に successful し た. さ ら に こ の マ ウ ス を with い て Cre リ コ ン ビ ナ ー ゼ が know す る loxP assortment import ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の make に も successful し た.

项目成果

摂食調節ニューロンの求心性神経回路網の形態機能解析

喂养调节神经元传入网络的形态和功能分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 塩田清二;影山晴秋;竹ノ谷文子;影山 晴秋
• 通讯作者: 影山 晴秋

Peptidomic identification and biological validation of neuroendocrine regulatory peptide-1 and -2

神经内分泌调节肽-1和-2的肽组学鉴定和生物学验证

• 发表时间: 2007
• 期刊: J Biol Chem. 282-36
• 作者: Dezaki K;et al.;Kageyama H.;Guan JL.;Hori Y.;Kageyama H.;Takenoya F.;Yamaguchi H.
• 通讯作者: Yamaguchi H.

Neuronal interaction between melanin-concentrating hormone- and alpha-melanocyte-stimulating hormone-containing neurons in the goldfish hypothalamus.

金鱼下丘脑中含有黑色素浓缩激素和α-黑素细胞刺激激素的神经元之间的神经元相互作用。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Peptides 29
• 作者: Shimakura S;et al.
• 通讯作者: et al.

Neural networks of several novel neuropeptides involved in feeding regulation.

• DOI: 10.1016/j.nut.2008.06.016
• 发表时间: 2008-09
• 期刊: Nutrition
• 影响因子: 4.4
• 作者: S. Shioda;F. Takenoya;M. Yagi;Lihua Wang;Yasunori Hori;H. Kageyama

Morphological interaction between galanin-like peptide- and dopamine-containing neurons in the rat arcuate nucleus

大鼠弓状核中甘丙肽样肽和含多巴胺神经元之间的形态学相互作用

• 发表时间: 2008
• 期刊: Regul Pept. 145-1-3
• 作者: Dezaki K;et al.;Kageyama H.;Guan JL.;Hori Y.;Kageyama H.
• 通讯作者: Kageyama H.