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腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒の病原性に関する研究

副溶血弧菌耐热溶血素的致病性研究

基本信息

批准号：
02670180
负责人：
西渕光昭
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

腸炎ビブリオおよび類似ビブリオの産生する耐熱性溶血毒(TDH)の病原的役割を明らかにする為に、以下のような順序で研究を進め、それぞれに示したような成果を得た。1.腸炎ビブリオはTDHのみならず、類似する溶血毒(TDHーrelated hemolysin,TRH)も同時に産生する可能性があるので、TRHを特異的に検出するDNAプロ-ブを用いて、TRHを産生する能力のある菌株とない菌株を区別した。2.患者から分離された神奈川現象陽性分離菌株は、TDHをコ-ドする遺伝子を2コピ-持つ(tdh1およびtdh2)。その代表菌株として、TRH産生能力のないAQ3815株を選出した。3.AQ3815株のtdh1遺伝子をin vivo recombination法によって変異遺伝子置換して、不活化したところ、殆ど溶血活性の低下が認められなかった。従ってtdh1遺伝子は殆ど発現されず、むしろtdh2遺伝子が菌の溶血活性を担っていると考えられた。4.AQ3815株のtdh2遺伝子のみをsuicide vectorを利用して不活化したところ、溶血活性は殆ど無くなったが、感度の高いELISA法でTDHの産生を測定したところ、残存するtdh1遺伝子の発現によって、野生型菌の産生するTDHの約5%に相当するTDHが産生されていることが明らかになった。5.AQ3815株の2コピ-のtdh遺伝子の両者の不活化し、TDHをまったく産生しないisogenic mutantを作製した。この変異株と野生型AQ3815の培養上清を、ウサギの腸管粘膜上皮をUssing Chamberにマウントた実験系で比較した。その結果、培養上清中のTDHは粘膜上皮のイオンの透過性を変化させており、腸管内の分泌作用に影響を及ぼしている可能性が示唆された。

The pathogen of heat resistant hemolytic virus (TDH) was identified and studied in the following order: 1. The possibility of simultaneous production of TDH,TRH and related hemolytic toxins (TRH), and the ability of TRH to produce TRH, are identified in the strains of enteritis. 2. Patient isolation Kanagawa phenomenon positive isolates, TDH 2 (tdh1 tdh2) AQ3815 strains were selected as representative strains for TRH production. 3. AQ3815 strain tdh1 gene in vivo recombination method to change the gene replacement, inactivation, almost hemolytic activity and low recognition. The hemolytic activity of Tdh1 gene was detected by PCR, and Tdh2 gene was detected by PCR. 4. The production of TDH was determined by ELISA with high sensitivity and no activation of the TDH vector of AQ3815 strain. The production of TDH was determined by ELISA with high sensitivity and about 5% of TDH was produced by wild type strain. 5. Inactivation of AQ3815 strain 2-TDH gene and production of isogenic mutant The culture supernatant of this mutant strain and wild type AQ3815 were compared. The results showed that the permeability of TDH in culture supernatant was changed, and the secretion of intestinal tract was affected.