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腸炎ビブリオの病原因子遺伝子の発現調節に関与する因子の解析

副溶血弧菌毒力因子基因表达调控因素分析

基本信息

批准号：
06670289
负责人：
西渕光昭
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670289/
关键词：
ビブリオ腸炎ビブリオ毒素遺伝子遺伝子発現調節

项目摘要

1)腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒をコードする遺伝子(tdh)の発現調節機構を調べるため、tdh遺伝子とレポーター遺伝子の融合遺伝子を作製した。phoA遺伝子との融合遺伝子をTnphoA法によって作製し、調節遺伝子(Vp-toxRS)が融合遺伝子の発現レベルに及ぼす影響をモニターした。腸炎ビブリオの野生株とVp-toxR変異株を比較したところ、Vp-toxRS遺伝子がtdh遺伝子の発現を促進することが示された。しかし大腸菌のバックグラウンドで、クローン化したVp-toxRS遺伝子を用いた発現系では、はっきりとした影響が見られなっかた。融合遺伝子の菌膜に及ぼす影響が懸念されたので、レポーター遺伝子としてlac遺伝子を用い、オペロン融合を形成させた。この場合、大腸菌のバックグラウンドでVp-toxRの影響が確認できたが、コンパチブルなプラスミドを利用した系ではプラスミドのコピー数に影響がでることが明らかになったので、染色体中に1コピーの融合遺伝子を導入したシステムを作製し、現在発現レベルをより正確にモニターしているところである。一方、Vp-toxR遺伝子のすぐ上流に熱ショック蛋白遺伝子を検出したので、現在この遺伝子の関与も含めて、環境要因がVp-toxRS遺伝子の発現調節を介してtdh遺伝子の発現調節をするシステムを調べている。とくにVp-toxRS遺伝子発現には、オートレギュレーションが関与している可能性が考えられるので、さらに複雑な融合遺伝子のシステムを作製して、現在この点も調査中である。2)tdh::TnphoA遺伝子の発現レベルを指標にして、大腸菌のバックグラウンドでtdh遺伝子の発現を促進する遺伝子をいくつかクローン化したので、現在これらを解析中である。

1)The regulation mechanism for the development of heat resistant hemolytic virus (tdh) in hepatitis B is regulated by the fusion gene of tdh gene. PhoA gene and fusion gene are controlled by TnphoA method, and Vp-toxRS is used to control the development of fusion gene. Vp-toxR gene expression is promoted by comparison with wild plants. E. coli and Vp-toxRS genes are used in the development of the system. The membrane of fusion gene and its influence on the formation of fusion gene In this case, the influence of Vp-toxR on E. coli is confirmed, and the number of Vp-toxR affected by E. coli is determined by the number of Vp-toxR affected by E. coli. The fusion gene introduced into the chromosome is controlled, and the correct Vp-toxR is now detected. The expression of Vp-toxR gene is regulated by environmental factors, such as the relationship between protein expression and protein expression, and the regulation of protein expression. The possibility of Vp-toxRS gene discovery is examined in this paper, and the possibility of fusion gene discovery is investigated in this paper. 2)tdh::TnphoA gene expression is an indicator of Escherichia coli and tdh gene expression is promoted.