C,difficileが産生する赤血球凝集活性を欠くトキシンAの性状解析

艰难梭菌产生的缺乏血凝活性的毒素 A 的表征

• 批准号: 02670178
• 负责人: 神谷 茂
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670178/
• 关键词: C.difficile; トキシンA; 赤血球凝集活性; 変異型トキシン; アフィンティクロマトグラフィ-; イムノブロッティング; 腸管毒性

Clostridium difficile培養上清をモノQカラムを用いたFPLCにより分析した結果、トキシンA(エンテロトキシン)画分の細胞毒性ピ-クと赤血球凝集(HA)活性ピ-クとが解離することがわかった。StepーwiseのNaCl溶出実験により、この解離は溶出時のNaCl濃度差に基ずくものではないことが明らかにされ、C.Difficileの培養上清中にはHA活性を欠く変異性トキシンAが存在することが示唆された。培養上清のサイログロブリンアフィニティクマトグラフィ-素通り画分(HA活性陰性)を用いてQセフアロ-スFF及びモノQーFPLCを行ない変異型トキシンAを精製した。未変性及びSDSーPAGEの結果、変異型トキシンAの分子量はHA活性をもつトキシンAと同じく未変性状態で540kDa、変性状態で240kDa(主バンド)であった。トキシンAに対するモノクロ-ナル抗体を用いたSDSーPAGE後のイムノブロッティングにより、変異型トキシンAの240kDaの主バンドはトキシンAと同様に抗体と強く反応することが明らかにされた。また還元時、160kDaのマイナ-バンドが変異型トキシンAに比べトキシンAで強く検出された。変異型トキシンAの生物活性をトキシンAのそれと比較した。変異型トキシンAはトキシンAと同程度の細胞毒性、マウス致死毒性、腸管毒性(ウサギ結紮腸管試験による)をもつことが明らかにされた。キモトリプシンを含まないトリプシン(Type XIII)を用てい酵素処理をしても、変異型トキシンAのHA活性が回復されたり、トキシンAのHA活性が消失するようなことはなかった。トキシンAのHA活性の生物学的意義は未だ明らかにされていないが、本トキシンの腸管上皮細胞への結合の際に重要な役割をなすものと考えられている。しかし今回得られた結果は、トキシンAのHA活性は腸管毒性の発現に必要でないことを示唆している。

Clostridium difficile culture supernatant を モ ノ Q カ ラ ム を with い た FPLC に よ り analysis し た results, ト キ シ ン A (エ ン テ ロ ト キ シ ン) draw points の cytotoxicity ピ - ク と red blood cell aggregation (HA) active ピ - ク と が dissociation す る こ と が わ か っ た. Step ー wise の NaCl dissolution be 験 に よ り, こ の dissociation は dissolution の when NaCl concentration difference に base ず く も の で は な い こ と が Ming ら か に さ れ, C.D ifficile の culture supernatant of に は を owe く HA activity - heterosexual ト キ シ ン exist A が す る こ と が in stopping さ れ た. Culture supernatant の サ イ ロ グ ロ ブ リ ン ア フ ィ ニ テ ィ ク マ ト グ ラ フ ィ - element tong り draw points (negative) HA activity を with い て Q セ フ ア ロ - ス FF and び モ ノ Q ー FPLC を line な い - alien ト キ シ ン A を refined し た. Not - and び ー SDS PAGE の results, variations alien ト キ シ ン A の は molecular weight HA activity を も つ ト キ シ ン A と with じ く not で 540 kda, - state - sex で 240 kda (main バ ン ド) で あ っ た. ト キ シ ン A に す seaborne る モ ノ ク ロ - ナ を ル antibody with い た ー SDS PAGE after の イ ム ノ ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り, - alien ト キ シ ン A の 240 kda の main バ ン ド は ト キ シ ン と with others in A strong と く に antibody against 応 す る こ と が Ming ら か に さ れ た. ま た was yuan and 160 kda の マ イ ナ - バ ン ド が - alien ト キ シ ン A に than べ ト キ シ ン A strong で く 検 out さ れ た. Variant トキシ をトキシ A <s:1> biological activity をトキシ をトキシ A <s:1> それと comparison <s:1> た た - different ト キ シ ン A は ト キ シ ン A と の cell toxicity, the same extent マ ウ ス lethal toxicity, bowel toxicity (ウ サ ギ ligation insufflate test に よ る) を も つ こ と が Ming ら か に さ れ た. Contains キ モ ト リ プ シ ン を ま な い ト リ プ シ ン (Type XIII) を with て い enzyme 処 Richard を し て も, - ト キ シ ン A の HA active reply が さ れ た り, ト キ シ ン A の が HA disappeared す る よ う な こ と は な か っ た. ト キ シ ン A の HA の biology active significance は not だ Ming ら か に さ れ て い な い が, this ト キ シ ン の insufflate epithelial cells へ の combining の interstate に important cut を な service な す も の と exam え ら れ て い る. The られた results of られた, トキシ, トキシ, <s:1>, A, <s:1>, HA activity, <s:1>, intestinal toxicity, and the occurrence of に necessary でな, <s:1>, とを suggest て, る, る.

项目成果

S.Kamiya: "Modification of purification method for Clostridium difficile toxin A by thyroglobulin affinity chromatography and characterization of the purified toxin A" Japanese Journal of Medical Science and Biology. 42. 186-187 (1989)

S.Kamiya：“通过甲状腺球蛋白亲和色谱法改进艰难梭菌毒素 A 的纯化方法以及纯化毒素 A 的表征”《日本医学科学与生物学杂志》。

S.Kamiya: "Detection and characterisation of a nonーhaemagglutinating form of Clostridium difficile toxin A" Infection and Immunity.

S. Kamiya：“艰难梭菌毒素 A 的非血凝形式的检测和表征”感染和免疫。

S.Kamiya: "Detection of variant toxin A without haemagglutination activity of Clostridium difficile,and analysis of its biochemical and biological characteristics" Japanes Journal of Medical Science and Biology.

S.Kamiya：“艰难梭菌无血凝活性的变异毒素A的检测及其生化和生物学特性的分析”日本医学科学和生物学杂志。

S.Kamiya: "Recovery of spores of Clostridium difficile altered by heat or alkali" ournal of Medical Microbiology. 29. 217-221 (1989)

S.Kamiya：“通过热或碱改变的艰难梭菌孢子的回收”医学微生物学杂志。

S.Kamiya: "Purification and Characterisation of Clostridium diffcile toxin A by bovine thyroglobulin affinity chromatography and dissociation in denaturing conditions with or without reduction" Journal of Medical Microbiology. 30. 69-77 (1989)

S.Kamiya：“通过牛甲状腺球蛋白亲和层析和在有或没有还原的变性条件下解离来纯化和表征艰难梭菌毒素 A”《医学微生物学杂志》。