ダイオキシンの免疫化学的測定法の開発

二恶英免疫化学测定方法的研制

• 批准号: 02670233
• 负责人: 高垣 裕
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Osaka Prefectural Institute of Public Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670233/
• 关键词: ダイオキシン関連物質; モノクロナ-ル抗体; 酵素免疫測定法

1.抗原の作製:2,4ーDichlorophenoxy acetic acid(2,4ーD)の活性エステルをN,N'ーDicyclohexylcarbodiimide及びNーHydroxysuccinimideを使用して合成した。これを用いて2,4ーDーhIgG及び2,4ーDーBSAを作製した。2.免疫及び細胞融合:6週令のマウス(♀,A/J)にComplete Freund's Adjuvantと共に2,4ーDーhIgGを腹腔内に投与した。5週間後に抗原のみで再度免疫し、3日後に免疫した脾細胞を取り出しX63ーAg8ー6.5.3.細胞とポリエチレングリコ-ル(MW=1,500)を用いて細胞融合を行なった。3.抗体のスクリ-ニング及びクロ-ニング:抗体の測定はポリスチレン製96ーwellーplatesに2,4DーBSAをコ-トした物を用いて測定した。また限界希釈法を用いてクロ-ニングを行なった結果、14クロ-ンのモノクロナ-ル抗体産生細胞が得られた。4.ハプテンにより抗原抗体結合反応が抑制されるクロ-ンの選択:Inhibitorとして2,4ーDichlorophenolを使用して、得られた各クロ-ンの培養上清について調べた。その結果4つのクロ-ン、138ー1、302、839、848でハプテンにより抗原抗体結合反応が抑制される事が明らかになった。5.抗体の特異性の検討:Dichlorophenolの異性体、2,3ー,2,4ー,2,5ー,2,6ー,3,4ー,3,5ーDichlorophenol(6種類)を用い、クロ-ン138ー1(IgG_1,κ)について調べた結果、2,4ー及び3,4ーDichlorophenolに対して特異性が非常に高く、2,3ー及び3,5ーDichlorophenolはほとんど、また2,5ー及び2,6ーDichlorophenolは全く結合しない事が明らかになった。この抗体を用いてサンドイッチassayの検討を現在行なっている。以上の事から今回得られた抗2,4ーDichlorophenylモノクロナ-ル抗体はダイオキシンなどの環境汚染物質をサンドイッチassay法で測定できる可能性が示された。

1. Antigen preparation:2,4-Dichlorophenoxy acetic acid(2,4-D) is used as an active ingredient in the synthesis of N, N'-Dicyclohexylcarbodimide and N-Hydroxysuccinimide. This is the first time I've ever seen a person who's been using hIgG and BSA. 2. Immunization and cell fusion:6 weeks old, Complete Freund's Adjuvant, total 2,4-D, intraperitoneal administration After 5 weeks, the antigen was re-immunized, and after 3 days, the spleen cells were extracted from X63-Ag8 - 6.5.3. The cells were mixed with cells (MW=1,500). 3. Antibodies are detected in 96-well plates and in 2,4D-BSA. The results of the method were as follows: 14. Antibody-producing cells were obtained. 4. Antigen and antibody binding reaction inhibition:Inhibitor and 2,4-Dichlorophenol are used to obtain the supernatant of each culture. The results of the study were as follows: 4, 138, 302, 839, 848. 5. Specificity of antibodies:Dichlorophenol heteroforms, 2,3-,2,4-,2,5-,2,6-,3,4-,3,5-Dichlorophenol(6 species), Crotone-138 - 1(IgG_1,κ), 2,4-and 3,4-Dichlorophenol, very high specificity, 2,3-and 3,5-Dichlorophenol, 2,5-and 2,6-Dichlorophenol, very high specificity. This antibody is used to detect the presence of the virus. The above results show that the possibility of detecting environmental pollutants by anti-2,4-Dichlorophenyl antibody is very high.

项目成果

Yutaka Takagaki: "The sandwich assay of dioxin related compounds using monoclonal antibodies against 2,4ーdichlorophenyl group." Journal of the Association of Official Analytical Chemists.

Yutaka Takagaki：“使用针对 2,4-二氯苯基的单克隆抗体对二恶英相关化合物进行夹心测定。”官方分析化学家协会杂志。