肝組織培養によるヒト伊東細胞の分離法についての研究

肝组织培养分离人Ito细胞方法的研究

基本信息

  • 批准号:
    02670316
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.45万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1990
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1990 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

手術時得られた切除肝より比較的簡単に、しかも大量のヒト肝伊東細胞を分離する方法を確立した。1.方法:切除肝を細切し組織培養を行うと切片周囲に種々の細胞が増殖する。この細胞を8,13,18%metriamide溶液の三層比重遠心で上層、中層の境に集まる伊東細胞を多く含む細胞について伊東細胞の同定を行なった。伊東細胞の同定は光顕、電顕による形態学的検討、細胞内vitaminA含有脂肪滴の確認、retinol添加培養系でのretinolの取込にて行なった。また細胞中のdesmin陽性物質の存在を検討するため、培養細胞につきdesminに対する単および多抗体を用いてperoxidase antiperoxidase法による免疫組織化学的に染色を行なった。2.成績:(1)形態学的観察;三層比重遠心法により分離した細胞は光顕的には扁平、多足状で突起で互いに連なる。細胞内脂肪滴は培養組織周辺に伸展する細胞内には多数認められるが分離後には極く少数の細胞内にのみ認めない。電顕的には細胞内脂肪滴の存在、粗面小胞体の発達が特徴的でこれらの形態は従来から報告にあるヒトの伊東細胞について形態と極めて類似であった。(2)VitaminA蛍光の証明;蛍光顕微鏡下波長330nmの条件下で淡い蛍光が脂肪滴に一致して認めた。(3)Retinolの取込;retinol添加培養3日後には約80%の細胞内にvitaminAを含む脂肪滴の出現が見られた。(4)細胞内desminの証明;2ー4代継代培養した細胞内には核を中心にに拡がるdesmin陽性物質の存在が確認された。またこの方法では肝切片500mgから大略10^6個の細胞の採取が可能である。3,総括:ヒト伊東細胞を大量に分離する方法の報告は未だない。今後はこの方法にて分離したヒト伊東細胞を用いてヒトの肝線維化の機序を明らかにして行きたい。
The method of separating large numbers of liver cells was established. 1. Methods: The resected liver was dissected and cultured. The cells were cultured in vitro. Three layers of 8,13,18% metriamide solution are concentrated in the upper and middle layers of Ito cells. Ito cells were characterized by light and electron microscopy, identification of intracellular vitaminA lipid droplets, retinol addition and retinol extraction. The presence of desmin-positive substances in cultured cells was investigated by immunohistochemical staining with peroxidase antiperoxidase. 2. Results:(1) Morphological observation; three-layer specific gravity remote center separation of cells against light, flat, multi-legged projections and mutual connection. Intracellular fat droplets extend around the culture tissue, and most of the intracellular fat droplets are isolated from the culture tissue. The existence of intracellular fat droplets, the development of rough cells, and the characteristics of electricity are similar to those of Ito cells. (2)VitaminA is proved to be stable under the condition of 330nm wavelength under microscope. (3)Retinol was extracted and 80% vitaminA and lipid droplets were found in the cells after 3 days of culture. (4)The presence of desmin positive substances in the nucleus was confirmed after 2 - 4 generations of culture. This method is possible with liver slices of 500mg or approximately 10^6 cells. 3. Summary: The report on the method of mass isolation of Ito cells has not been completed. In the future, this method will be used to isolate Ito cells, and the mechanism of liver maintenance will be clarified.

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
中川 正則,中林 仁美,中野 博: "ヒト伊東細胞の分離に関する研究" 肝臓. 32. 169-174 (1991)
Masanori Nakakawa、Hitomi Nakabayashi、Hiroshi Nakano:“人类伊藤细胞分离的研究”肝脏。 32. 169-174 (1991)
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  • 期刊:
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    0
  • 作者:
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知道了