アルコール性肝線維症における伊東細胞のコラゲン分解酵素活性の調節動態

酒精性肝纤维化中 Ito 细胞胶原酶活性的调控动态

• 批准号: 05670492
• 负责人: 中野 博
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670492/
• 关键词: ヒト伊東細胞; アセトアルデヒド; IV型コラゲン; IV型コラゲナーゼ; TIMP-1; アルコール; 線維肝

ヒト伊東細胞(IC)の培養系にアセトアルデヒド(AA)を添加しIV型コラゲン(IVC),IV型コラゲナーゼ(IVCN),TIMP-1の変動を検討した.ICは私の方法にて分離し,5-7代継代した細胞を用いた.材料・方法(1)分離IC培養系へのAA添加条件:分離ICを10%牛胎児血清を含むDMEM溶液で5%CO_2の条件下で培養,前定常状態に至った時期に50mug/mlアスコルビン酸を含むDMEM溶液にAAを終濃度0,35,50,90,および175mumo/Lに添加し3日間培養を行なった.その結果検討したAAの濃度ではICの障害性は認められなかったため,175mumol/Lの濃度にAAを添加した群をAA添加群とした.(2)培養上清および細胞層中のIVC,IVCN,TIMP-1の定量:培養上清はトリス緩衝液に透析後,限外濾過法にて1mlに濃縮した.細胞層はラバーポリスマンにて回収,超音波処理,遠心後その上清を用いた.IVCは日本DPC社製7Sコラゲン測定キット,IVCNはヤガイ中央研究所製IVCN測定キット,TIMP-1は富士薬品工業製測定キットを用いて測定した.成績(1)IVC:a)上清;AA添加群のIVC濃度は対照の2.9ng/mlに比し2.5ng/mlと低下がみられたが有意ではなかった.b)細胞層;対照の5.3ng/mlに比し添加群では2.5ng/mlと低下がみられた.(2)IVCN:a)対照の蛍光強度15.1に比し添加群では23.0と増加した.(3)TIMP-1:AA添加によるTIMP-1の変動は観察されなかった.考案・結論J.LiらはAAの175mumol/L添加は培養ICのI型,総コラゲン生成は増加させると報告している.今回検討した結果では増加は認められなかった.一方、IVCNはAA添加により活性の上昇がみられた。今回の実験系でIVC上昇がみられなかったことについては培養系にlathyrogen添加を行なわなかったことも一因かもしれない。IVCNの上昇はK.S.Henleyらのin vivoの成績を裏付けるものである。今後さらに検討を続けたい。

The culture system of Ito cells (IC) was isolated by the method of isolation, and the cells were cultured for 5 -7 passages with the addition of type IV cytosine (IVC), type IV cytosine (IVCN) and TIMP-1. Materials and Methods (1) The conditions of AA addition for isolation of IC culture system: isolation of IC, 10% fetal bovine serum, DMEM solution containing 5% CO_2, 50 ug/ml AA, DMEM solution containing AA, final concentration of AA, 0, 35, 50, 90, 175mumo/L, addition of AA, 3 days culture. The results showed that the concentration of AA was not harmful to IC, and the concentration of 175mumol/L was added to AA. (2)Quantification of IVC,IVCN,TIMP-1 in culture supernatant and cell layer: After dialysis in culture supernatant buffer, the supernatant was concentrated to 1ml by limited filtration. The cell layer is processed by ultrasonic wave, and the supernatant is detected by IVCN. Results (1)IVC:a) IVC concentration of supernatant;AA added group was 2.9ng/ml lower than that of control group; b) IVC concentration of cell layer; IVC concentration of control group was 2.5ng/ml lower than that of control group; c) IVC concentration of supernatant; AA added group was 2.5ng/ml lower than that of control group. (2)IVCN:a) The illumination intensity is 15.1 and the addition group is 23.0. (3)TIMP-1:AA is added and TIMP-1 is detected. Conclusion J. Li: AA and 175mumol/L were added to culture IC and I type, and the total production rate was increased. The result of this investigation is that we have to pay attention to it. One side, IVCN add AA, the activity increases. The IVC is increasing in the present case. IVCN rose to K.S.Henley in vivo. From now on, we'll discuss the future.

项目成果

中川正則 中林仁美 中野博: "ヒト伊東細胞の分離に関する研究" 肝臓. 32. 169-179 (1991)

Masanori Nakakawa、Hitomi Nakabayashi、Hiroshi Nakano：“人类伊藤细胞分离的研究”肝脏。 32. 169-179 (1991)