ヒト伊東細胞のコラーゲン合成に関する研究

既に報告した方法(肝臓32:169-74,1991)に従い、細切したヒト切除肝の組織培養で切片周囲に増生した細胞より、metrizamide溶液の三層比重遠心法を用いヒト伊東細胞を分離した。伊東細胞の同定は光顕、電顕的形態、細胞内ビタミンA含有脂肪滴の存在、培養液中に添加したレチノールの取込で行なった。分離した細胞を3-4代継代した細胞につき、下記の検討を行なった。1、ヒト伊東細胞内コラーゲンの免疫組織学的検索上記培養伊東細胞を固定後、和歌山医大病理学教室・大島章教授より提供を受けたI、III、IV型ヒト単抗体を用いてperoxidase-antiperoxidase法にて細胞内I、III、IV型コラーゲンの局在を検討した。その結果、I、III型コラーゲンは主として核周辺部に網目状、あるいは顆粒状に染色され、一部は細胞質周辺辺縁部に小顆粒が連なる形状で染色された。 一方、IV型コラーゲンはI、III型と同様核周辺部にみられるものの染色性は低かった。しかしI、III型に比し細胞内に広く網目状に染色された。(肝臓33:327-330,1992)2、伊東細胞内I、IIIおよびIV型プロコラーゲンm-RNAの発現佐賀医大内科・堺隆弘教授より提供を受けたヒトI、III、IV型プロコラーゲンcDNAを含むプラスミドを大腸菌に導入し増殖させた後、各プロコラーゲンcDNAを抽出した。得られたcDNAは制限酵素処理後、電気泳動でそのサイズを確認した。一方、培養伊東細胞からRNAを抽出し現在northern blot hybridizationにて各型プロコラーゲンmRNAの発現を確認中である。

既に報告した方法(肝臓32:169-74,1991)に従い、細切したヒト切除肝の組織培養で切片周囲に増生した細胞より、metrizamide溶液の三層比重遠心法を用いヒト伊東細胞を分離した。伊東細胞の同定は光顕、電顕的形態、細胞内ビタミンA含有脂肪滴の存在、培養液中に添加したレチノールの取込で行なった。分離した細胞を3-4代継代した細胞につき、下記の検討を行なった。1、ヒト伊東細胞内コラーゲンの免疫組織学的検索上記培養伊東細胞を固定後、和歌山医大病理学教室・大島章教授より提供を受けたI、III、IV型ヒト単抗体を用いてperoxidase-antiperoxidase法にて細胞内I、III、IV型コラーゲンの局在を検討した。その結果、I、III型コラーゲンは主として核周辺部に網目状、あるいは顆粒状に染色され、一部は細胞質周辺辺縁部に小顆粒が連なる形状で染色された。 一方、IV型コラーゲンはI、III型と同様核周辺部にみられるものの染色性は低かった。しかしI、III型に比し細胞内に広く網目状に染色された。(肝臓33:327-330,1992)2、伊東細胞内I、IIIおよびIV型プロコラーゲンm-RNAの発現佐賀医大内科・堺隆弘教授より提供を受けたヒトI、III、IV型プロコラーゲンcDNAを含むプラスミドを大腸菌に導入し増殖させた後、各プロコラーゲンcDNAを抽出した。得られたcDNAは制限酵素処理後、電気泳動でそのサイズを確認した。一方、培養伊東細胞からRNAを抽出し現在northern blot hybridizationにて各型プロコラーゲンmRNAの発現を確認中である。