歯髄細胞のDNA分析に関する基礎的歯科法医学的研究

牙髓细胞 DNA 分析的牙科法医学基础研究

• 批准号: 02670817
• 负责人: 山本 勝一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670817/
• 关键词: DNA指紋法; 親子鑑定; Y染色体; 歯髄細胞; PCR法; 男女識別; 電気泳動; 個人識別

近年法医学領域においては、末梢白血球からDNAの抽出によって高い確率で個人識別の可能性を明らかにしている。今回我々は、歯科法医学的立場から歯牙の歯髄細胞を用いて、そのDNA抽出に成功したのでさらに歯牙による親子鑑定および男女識別への応用を試み、次の結果をえた。1.親子鑑定 ヒト遺伝子中のイントロンに存在し、高度に多型性を示す縦列反復配列を検出する「DNA指紋法」と呼ばれる分析法を用いると、検出されるバンドがメンデルの法則に従って親から子へ正確に遺伝するため親子鑑定に応用できることが知られている。そこで、我々は、まず子供の拔去歯牙の歯髄細胞におけるDNA分析を行い、さらにその両親の血液中の白血球からDNAを抽出し、両者の比較検討を行ったところ、確実な親子関係の存在することが確認された。2.男女識別(1)Y染色体検出法Y染色体の反復配列は、ある種の制限酵素では切断されず、電気泳動を行うと、特有のバンドとして検出されることが知られている。そこで、男性の歯髄細胞から得られたDNAを制限酵素HaeIIIで切断し、アガロ-スゲル電気泳動を施行したところ、3.4kb付近にバンドが認められ、男女識別が可能であった。(2)Y染色体特定部位の増幅による検出法 Y染色体中の特徴的塩基配列をDNAの酵素増幅法(PCR法)により増幅レゲル電気泳動を行うと、特有のバンドとして検出される。我々は男性歯髄細胞から得られたDNAを、発注合成したプライマ-を用いて増幅し、電気泳動を施行すると、154bp付近にバンドの発現が認められた。このPCR法は微量のDNAでも判定可能であるため、歯科法医学実務における検査としては極めて有用であるが、外来DNAの混在などがあり、問題点も存在するため、さらに検討中である。

In recent years, the field of forensic medicine has been developing rapidly, and the possibility of personal identification has been greatly improved. In this paper, we present the results of successful dental paternity testing and gender identification from the standpoint of dental forensics. 1. DNA fingerprinting and analysis methods are used to detect the presence and high polymorphism of DNA in paternity tests. DNA analysis of extracted dental cells from the donor's teeth was performed, DNA extraction of leukocytes from the donor's blood was performed, and the paternity was confirmed. 2. Male and female identification (1)Y chromosome identification method Y chromosome repeated alignment, species restriction enzyme, reverse cleavage, electrophoresis, unique mutation, reverse transcription, reverse transcription, reverse transcription. In addition, male and female cells were isolated from the DNA restriction enzyme HaeIII, which was used to cut off and isolate DNA from the cells. The 3.4 kb DNA restriction enzyme was used to identify male and female cells. (2)Y Amplification of specific sites of chromosomes Detection of specific sites of Y chromosome DNA amplification (PCR) Amplification of specific sites of Y chromosome DNA amplification We found DNA in male cells, and we found DNA in 154 bp cells, and we found DNA in 154bp cells. The PCR method is used to determine the possibility of trace DNA, to detect the extremely useful DNA, to detect the presence of foreign DNA, and to detect the presence of problematic DNA.