抗体アナログとしての動物レクチンに関する研究

动物凝集素作为抗体类似物的研究

• 批准号: 02680132
• 负责人: 川嵜 伸子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02680132/
• 关键词: コングルチニン; 血清レクチン; 動物レクチン; 限定加水分解; ウシ血清; Nーアセチルグルコサミン; コングルチネ-ション; マンナン結合タンパク質; 固定化レクチン; レクチンブロッティング; 糖タンパク質; 糖結合特異性

コングルチニン(Kg)は免疫複合にに結合した補体iC3bと結合する(コングルチネ-ション)、Nーアセチルグルコサミン(GlcNAc)に特異的なC型動物レクチンである。Kgを単離する際、予め血清の非働化を必要とする。昨年度の研究において、血清を非働化しない場合には、Kg分子のサブユニットが低分子化することを見い出した。この低分子Kgの性状について調べ、補体の活性化に伴うコングルチニンの分子的変化と活性の関係について明らかにした。1.非働化ウシ血清をSepharose4Bーマンナンカラムにかけることにより、溶出液中に分子量約1,000k、サブユニット45kDaの精製Kgが単離される。一方、非働化しない血清を同様に処理した場合、Kgはほとんど単離されず、マンナン結合活性は再アフィニティカラムの洗液中に回収された。2.洗液中の結合タンパク質(Kg^*)は溶液中ではKgと同様のマンナン結合活性を有し、結合特異性もGlcNAcであるが、EAiC3bに対するコングルチネ-ション活性をもたず、EAiC3bに結合もしなかった。3.Kg^*では分子量約600k、サブユニットサイズ38kDaに減少していた。また、非還元条件でのSDSーPAGEではKgは主として145KDa、3量体を示すが、Kg^*は還元条件下同様の単量体のバンドのみを示すことより、KgのN末端部分のCysのジスルフィド結合が3量体形成に関与していることがわかった。KgおよびKg^*のN末端近傍のアミノ酸配列分析の結果、Kg^*はKgのN末端より54番目のArgのC末端側で分解されていることがわかった。 ^<125>Iー標識Kgを非働化しない血清の1回目のマンナンカラムの溶出液と反応させると ^<125>Iー標識Kg^*へ変換し、この変換はAPMSF、ClINHにより阻害された。4.以上の結果より、Kgは血清中の内在性セリンプロテア-ゼにより、限定加水分解された結果、なんらかの高次構造の変化が起こり、コングルチネ-ション活性を失うことが推定された。

C-type animals specific for immune complex binding (Kg), complement iC3b binding (Kg), and N-type complex binding (GlcNAc). When you leave, you have to change your mind. In the past year, the study of serum was carried out in the case of low molecular weight. The characteristics of low molecular weight, complement activation, molecular transformation and activity relationship 1. Non-purified serum Sepharose4B, molecular weight 1, 000k, purified 45kDa in the extract. In the case of a single, non-reactive serum, the concentration of the active substance in the serum is higher than that in the control solution. 2. The binding activity of the binding substance (Kg^*) in the wash solution and the binding specificity of the binding substance (Kg ^*) in the solution are different. The binding specificity of GlcNAc and EAiC3b is different. 3.Kg^* SDS PAGE under non-reductive conditions shows that the Cys of the N-terminal part of Kg is associated with the formation of the 3-mer. The results of acid alignment analysis of Kg^* and Kg^* near the N-terminal, the decomposition of Kg^* and Kg ^* near the N-terminal, Arg and C-terminal were analyzed. ^<125>I <125>Identification Kg^* Change in concentration, APMSF, ClINH 4. The results above indicate that the intrinsic properties of serum, the limited hydrolysis results, the higher-order structural changes, and the loss of serum activity are presumed.

项目成果

Nobuko KAWASAKI: "Alteretion of the structure and function of conglutinin by endogenous protease(s)." Proceeding of 11th International Symposium on Glycoconjugates. (1991)

Nobuko KAWASAKI：“内源性蛋白酶改变羽扇豆凝集素的结构和功能。”

Nobuko KAWASAKI: "Alteration of the structure and function of conglutinin by endogenous protease(s)." Glycoconjugate J.8. 230 (1991)

Nobuko KAWASAKI：“内源性蛋白酶改变了球凝素的结构和功能。”

川嵜 伸子: "タンパク質化学(矢島 治明 編) 第5巻血漿タンパク質6.コングルチニン" 廣川書店, (1992)

川崎伸子：《蛋白质化学（矢岛春明编）第 5 卷血浆蛋白 6. Conglutinin》广川书店，（1992 年）

川嵜 伸子: "コングルチニンの内在性プロテア-ゼによる構造と機能の変化" 生化学. 63. 943 (1991)

Nobuko Kawasaki：“内源性蛋白酶改变球凝素的结构和功能”生物化学 63. 943 (1991)。

Nobuko KAWASAKI: "The loss of conglutination activity upon removal of the aminoーterminal 54 amino acid residues from conglutinin." J.Biochem.(1992)

Nobuko KAWASAKI：“从伴凝素中去除氨基末端 54 个氨基酸残基后，凝集活性丧失。”J.Biochem.(1992)