トランスジェニックマウスを用いたIn situ ハイブリダイゼ-ション法の確立

转基因小鼠原位杂交方法的建立

• 批准号: 03660298
• 负责人: 昆 泰寛
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03660298/
• 关键词: トランスジェニックマウス; In situハイブリダイゼ-ション; 免疫組織化学; 免疫電顕; ジゴキシゲニン; 下垂体; TSH; 腫瘍

当該研究者らは甲状腺刺激ホルモン(TSH)産生細胞に特異的な発癌モデル、あるいはTSH産生細胞を特異的に欠損する疾患モデルをトランスジェニックマウス(TgM)で作成中である。すなわちヒトTSH β鎖プロモ-タ-/エンハンサ-(TSH β P/E)領域ーSV40ウィルスT抗原(SV40T)DNAから成る融合遺伝子を導入し、TSH産生細胞腫瘍TgMを、また同様にTSH β P/Eージフテリア毒素A鎖(DTA)DNAの融合遺伝子を導入しTSH産生細胞を特異的に欠損するTgMを作成した。現在までTSH特異発癌モデルTgMが確立された。前者において基質的変化(癌化)のみられたものは4例で、今後の動向を観察しなければならない。これら4例は通常の光顕的ならびに電顕的固定後、純形態学的手法ならびに免疫組織化学的手法でTSH産生細胞の腫瘍性の他、成長ホルモン(GH)産生細胞、副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)産生細胞、プロラクチン(PRL)産生細胞ならびに黄体化ホルモン(LH)産生細胞に対する影響などが検討された。その結果、TSH産生細胞は弱陽性ながら増加し、またGH産生細胞ならびにPRL産生細胞がやや増加傾向を示した。逆に、ACTH産生細胞ならびにLH産生細胞は絶対数の変化を示さなかった。電顕的に増殖細胞は種々の直径を有する小型果粒を細胞質内に有していたが、コントロ-ルのものに比較し果粒数が少なく、そのほとんどのものは抗GH血清に反応する果粒であった。一方、In situハイブリダイゼ-ション法はタンパク質をコ-ドする還伝子をDNAレベルあるいはmRNAレベルで検出する方法である。当該研究者らは予備実験としてジゴキシゲニンを合成30bpオリゴヌクレオチドにラベリングすることに成功し、これを抗ジゴキシゲニン抗体と反応させ最終的にHRP標識血清で当該mRNAを検出することを試みたが、最終反応産物が光顕的検出には限界があり、本法のさらなる改良が必要と結論した。なお本研究内容な一部に関しては現在投稿論文の作成中である。

When the researcher created the thyroid stimulating hormone (TSH)-producing cell-specific cancer development disease, the TSH-producing cell-specific damage disease was identified. TSH β P/E domain SV40 T antigen (SV40 T)DNA fusion gene is introduced into TSH producing cells and TgM is introduced into TSH producing cells. TSH β P/E domain SV40 T antigen (SV40 T)DNA fusion gene is introduced into TSH producing cells and TgM specific to TSH producing cells is produced. TSH specific cancer detection is now established. In the former, the matrix transformation (cancer) was observed in 4 cases, and the future trend was observed. In 4 cases, the effects of TSH producing cells, GH producing cells, ACTH producing cells, PRL producing cells and LH producing cells were investigated by pure morphological and immunohistochemical methods. The results showed that TSH producing cells were weakly positive and GH producing cells and PRL producing cells tended to increase. ACTH and LH producing cells are the most important factors affecting the development of the disease. The number of small fruit grains in the cytoplasm of the cells grown by electricity is small, the number of small fruit grains in the cytoplasm is small, the number of small fruit grains in the cytoplasm is small, and the number of small fruit grains in the cytoplasm is small. A method of DNA sequencing and mRNA sequencing is described In this paper. When the researchers successfully synthesized 30bp anti-HRP antibody and anti-HRP labeled serum, they successfully detected the mRNA and finally detected the anti-HRP product. The content of this study is related to the preparation of the paper submitted at present.