抗ペルオキシダ-ゼ/抗アルカリホスファタ-ゼハイブリッド抗体の法医学的応用

抗过氧化物酶/抗碱性磷酸酶混合抗体的法医应用

• 批准号: 03670300
• 负责人: 玉置 嘉広
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670300/
• 关键词: 二重特異性モノクロ-ナル抗体; 抗ペルオキシダ-ゼ抗体; 抗アルカリホスファタ-ゼ抗体; 抗スルホン化DNA抗体; DNAフィンガ-プリント; ハイブリッド・ハイブリド-マ

〔HAT感受性抗ペルオキシダ-ゼ抗体産生融合株の樹立〕ペルオキシダ-ゼ(HRP,20μg)で免疫したマウスの膝窩リンパ節細胞をP3U1骨髄腫細胞と融合させ,無血清培地ASF103で培養した。常法にしたがって選別,クロ-ン化後,抗HRP産生融合細胞株を樹立した。この細胞株を1週間8ーAzaguanine存在下で培養すると大部分死滅し約5%が生き残った。これを拡大培養した酵素HGPRT欠損株(すなわちHAT感受性株)とした。〔HAR感受性抗スルホン化DNA(SDNA)抗体産生融合細胞株の樹立〕マウスDNA断片をメタ重亜硫酸Naとメチルヒドロキシラミンでスルホン化した後BSAと結合させたものでマウスを免疫し,そのリンパ節細胞の一部をP3U1細胞と融合させ,上記の方法でHAT感受性抗SDNA産生株を樹立した。〔抗HRP/抗SDNA二重特異性ハイブリッド抗体産生株の樹立〕HAt感受性抗HRP産生株と抗SDN抗体産生細胞を融合させ,HAT選択後,二重特異性ハイブリッド抗体産生Triomaを樹立した。〔ハイブリッド抗体によるDNAフィンガ-プリントの検出〕ヒトのゲノムDNAのEcoR 断片を電気泳動し,スルホン化DNAプロ-ブとサザンハイブリダイズさせ,これをHRPと(HRPカラムで精製した)前記ハイブリッド抗体で検出すると,明瞭なDNAフィンガ-プリントが得られた。〔その他のハイブリッド抗体〕マウスをアルカリホスファタ-ゼで免疫し,そのリンパ節細胞を前記二種類のHAT感受性抗体産生株と融合させてTriomaを作製したが,目的とする二重特異性抗体(ハイブリッド抗体)はまだ得られていない。抗ALP抗体が活性中心をブロックしているためだと思われる。

[Establishment of HAT-sensitive anti-HRP antibody-producing fusion strains] HRP (20μg) was used to immunize the knee joint cells P3U1 osteoma cells and fuse them, and ASF103 was cultured in serum-free medium. After regular selection, HRP resistant fusion cell lines were established. Most of the cells were killed and about 5% were alive in the presence of Azaguanine within 8 weeks of culture. The enzyme HGPRT is deficient in large cultures (HAT susceptible plants). [Establishment of HAR-sensitive anti-SDNA (SDNA) antibody producing fusion cell strain] DNA fragments were isolated from a part of the node cells by fusion with BSA, and HAT-sensitive anti-SDNA producing strains were established by the method described above. [Establishment of anti-HRP/anti-SDNA double specificity antibody-producing strain] HAt-sensitive anti-HRP producing strain and anti-SDN antibody-producing cell fusion,HAT selection, double specificity antibody-producing Trioma establishment The DNA fragment of EcoR of DNA was electrophoresis, and the DNA fragment of EcoR of DNA was electrophoresis. The DNA fragment of EcoR of DNA was electrophoresis. The two types of HAT-sensitive antibody producing strains and fusion Trioma were produced in the presence of different types of HAT-sensitive antibodies. Anti-ALP antibody active center

项目成果

Yoshihiro TAMAKI: "Efficient Methods for preparation of monoclonal antibodies for forensic applications" International Journal of Legal Medicine.

Yoshihiro TAMAKI：“法医应用单克隆抗体制备的有效方法”国际法律医学杂志。

Yoshihiro TAMAKI: "Production of antiーsulfonated DNA/antiーperoxidase bispecific monoclonal antibody" Journal of Immunological Methods.

Yoshihiro TAMAKI：“抗磺化 DNA/抗过氧化物酶双特异性单克隆抗体的生产”《免疫学方法杂志》。