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抗チミン・ダイマー抗体によるDNA多型の検出

使用抗胸腺嘧啶二聚体抗体检测DNA多态性

基本信息

批准号：
07670496
负责人：
玉置嘉広
金额：
$ 1.41万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

クローン化したDNAプローブを使ってDNAの制限酵素断片長多型(ミニサテライト多型)を検出するサザン法は,手間がかかるうえに,アリールの長さを正確に決めることができないため,だんだん使われなくなり,PCR法によって簡単に増幅でき,1塩基の違いを識別できるマイクロサテライト(STR)の型判定が法医学的DNA多型分析の主流になった.STRのアリールを正確に決めるには,PCR産物を変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動した後,アリールの1本鎖を自動シ-クェンサーで分析するか,なんらかのマニュアル法で検出する.自動シ-クェンサーは高価で,簡単には購入はできない.そこで,経済的に,かつ簡易にバンドを検出するために,AAAG(すなわちCTTT)を反復単位とするSTR座であるACTBP2,AluVpA,FGA,D8S320,D11S488,D11S554を増幅し,変性ゲル電気泳動し,ナイロン膜にサザン・ブロットし,これを10分間紫外線照射することによってCTTT鎖をチミンダイマー(T-T)化した.このT-Tを,本研究で作製したモノクローナル抗体T-T(ペルオキシダーゼ標識)で首尾よく検出することができた.モノクローナル抗T-T抗体は,簡易な方法で作製した.細胞融合のパートナーであるマウス骨髄腫細胞P3U1の浮遊液の煮沸遠心上清を紫外線照射したもので同系マウスを免疫し,その膝窩リンパ節細胞とP3U1細胞を融合させて培養し,常法に従って抗T-T抗体産生ハイブリドーマをクローン化した.その後,抗体を含む腹水を得て,抗体をアフィニティ精製し,酵素標識して,STR分析に使用した.本法は,簡易な方法であり,法医学の実務への応用に適する.

DNA restriction enzyme fragment length polymorphism () STR typing is the mainstream of DNA polymorphism analysis in forensic science.STR typing is the main method of DNA polymorphism analysis in forensic science. STR typing is the main method of DNA polymorphism analysis. Automatic-. For example,AAAG(AAAG)(AAAG) This study was conducted to determine whether the T-T antibody (T-T) could be used as a marker. Anti-T antibodies are produced by simple methods. Cell fusion and culture of osteoma cells P3U1 in suspension and boiled supernatant, ultraviolet irradiation and syngeneic culture of osteoma cells P3U1 in culture, and production of anti-T antibodies by conventional methods. After the antibody was obtained, the antibody was purified, the enzyme identification was performed, and STR analysis was performed. This method is simple and applicable to forensic medicine.