PCR法によるパラフィン切片からのDNA法医病理診断

PCR法石蜡切片DNA法医病理诊断

• 批准号: 03670295
• 负责人: 福島 弘文
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670295/
• 关键词: PCR; ウイルス; ホルマリン; DNA; 組織; セントリコン30; タイピング; 増幅

法医DNA診断には血液、精液、毛髪等が比較的多く用いられてきた。形態学的検査として病理組織が利用されており、最近ではホルマリン固定パラフィン包埋組織からウイルス、ガン、遺伝子疾患のDNA解析が可能となり、診断としての利用価値が高くなりつつある。パラフィン包埋組織やホルマリン固定組織を用いる場合、組織のDNAの安定性が重要となる。本研究では、一定期間保存されたホルマリン固定組織やパラフィン包埋組織からテンプレ-トDNAを抽出し、(1)HLAのDNAからタイピング、(2)性別判定、(3)サイトメガロウイルス診断等について検討した。方法としてパラフィン包埋組織、ホルマリン固定組織から5μmの厚さの5〜6枚の組織を切り出し脱パラフィン処理後、PRoteinase KとSDSで完全に液状に可溶化を行ない、フエノ-ルで抽出後、微量濃縮チュ-ブ(セントリコン30)でテンプレ-トDNAを濃縮し、PCR法によってDNAを増幅した。その結果、(1)2年間保存したパラフィン包埋組織および2年間ホルマリン固定組織(脳、心、肝、肺、腎)からDNAタイピングが可能であった。(2)男女性別判定には男性を示す170bpのバンドが確認された。(3)サイトメガロウィルス感染の診断検査として肺、心のパラフィン包埋組織を用いたところ、その診断が可能であった。抽出方法を比較し、フェノ-ル・エタノ-ル沈殿法よりセントリコン30を用いた方がよりDNAを回収しやすいことを明らかにした。

Forensic DNA diagnosis に に blood, semen, hair and other が comparisons are mostly conducted using く られて た た た た た た. Morphology of check 検 と し て histopathologic が using さ れ て お り, recently で は ホ ル マ リ ン fixed パ ラ フ ィ ン embedding tissue か ら ウ イ ル ス, ガ ン の DNA, but 伝 disease resolution が may と な り, diagnostic と し て の using 価 high numerical が く な り つ つ あ る. Youdaoplaceholder0 <s:1> embedding tissue やホ やホ リ リ リ <s:1> fixing tissue を application of <s:1> る occasions, tissue <s:1> DNA <s:1> stability が is important となる. This study で は, save for a certain period of time さ れ た ホ ル マ リ ン fixed organization や パ ラ フ ィ ン embedding tissue か ら テ ン プ レ - ト DNA を spare し, (1) the HLA の DNA か ら タ イ ピ ン グ, (2) the sex determination, (3) サ イ ト メ ガ ロ ウ イ ル ス diagnosis に つ い て beg し 検 た. Methods と し て パ ラ フ ィ ン embedding organization, ホ ル マ リ ン fixed organization か ら 5 microns thick の さ 5 ~ 6 の の organization を り cutting out し パ off ラ フ ィ ン after 処 and PRoteinase K と SDS で に completely liquid に solubilization を line な い, フ エ ノ - ル で pumped out, trace enrichment チ ュ - ブ (セ ン ト リ コ ン 30) で テ ン プ レ - ト を enrichment し DNA, PCR method に よ っ て DNA を rights of し た. そ の results, (1) 2 years preservation し た パ ラ フ ィ ン embedding tissue お よ び 2 years ホ ル マ リ ン fixed organization (脳, heart, liver, lung, kidney) か ら DNA タ イ ピ ン グ が may で あ っ た. (2) Gender determination: に を male を す170bp <s:1> バ された ドが confirm された. (3) サ イ ト メ ガ ロ ウ ィ ル の ス infection diagnosis 検 check と し て lung, heart の パ ラ フ ィ ン embedding tissue を with い た と こ ろ, そ の diagnosis can で が あ っ た. Extraction method を し, フ ェ ノ - ル · エ タ ノ - ル Shen Dian method よ り セ ン ト リ コ ン 30 を い た party が よ り DNA を back 収 し や す い こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

Fukushima H.: "Using the immunostaining method and the polymerase chain reaction amplification for identifying mixedーup formalinーembedded tissues" Proc Internatl Symp Advances in Legal Medicine. 263-265 (1990)

Fukushima H.：“使用免疫染色方法和聚合酶链式反应扩增来识别混合的福尔马林包埋组织”Proc Internatl Symp Advances in Legal Medicine 263-265 (1990)。

Ichinose A.: "HLAーDQA1 and HLAーDPB1 gene polymphisms in the Japanese population." Advences in Forensic Haemogenetics.4. (1991)

Ichinose A.：“日本人群中的 HLA-DQA1 和 HLA-DPB1 基因多态性。”法医血液遗传学进展。4 (1991)。

Ota M.: "Application of modified PCRーRFLP method in forensic science." Proc Internatl Symp Advances in Legal Medicine. 474-476 (1990)

Ota M.：“改良 PCR-RFLP 方法在法医学中的应用。”Proc Internatl Symp Advances in Legal Medicine 474-476 (1990)。

Ota M.: "Modified PCRーRFLP method for HLAーDPB1 genotyping." Tissue Antigens.38. 60-71 (1991)

Ota M.：“用于 HLA-DPB1 基因分型的改良 PCR-RFLP 方法。”38（1991）。

福島 弘文: "ヒトDNA polymorphism実験技術と応用,分担:ゲノムDNAの精製" 東洋書店, (1991)

福岛博文：“人类DNA多态性实验技术和应用，作业：基因组DNA的纯化”东洋书店，（1991）