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PCR法によるDNA多型の解析

利用PCR方法分析DNA多态性

基本信息

批准号：
04670349
负责人：
福島弘文
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670349/
关键词：
PCR DNA 増幅遺伝子頻度多型プライマーアガロースゲル電気泳動

项目摘要

200人以上の血液からDNAを抽出した。各種のPCRプライマー(HLA-DQA1、HLA-DPB1、MCT 118、YNZ 22、Apo B、Col 2A)を合成し、PCR反応条件、熱変性、アニーリング合成の温度条件を検討した。最も多くのアリルが検出されたのはMCT 118であり、識別率、排除率ともに高値を示し、日本人においては極めて有効な遺伝子マーカーといえる。その遺伝子頻度分布はやや不均等で、20%近いアリルがいくつか認められた。Apo Bは日本人で多型性は低く、またYNZ 22も多くのアリルは認められないが、有効なマーカーであった。HLAのDQA1とDPB1の多型解析はPCR-RFLP法で行い、DQA1では8つのアリルがあり、DQA1-0301型が37.8%を示した。一方、DPB1は0501型が最も多く、11の型に分けられた。一般に用いられるPCR多型の分析方法はDNAを増幅し、その試料を電気泳動することによってアリルを検出している。しかしながら、アクリルアミドゲルで分析した結果は、極めて不正確である。アガロースゲルを用いた場合は正確な結果が得られ、従来、各研究室で分析された遺伝子頻度は今後使用出来ないことを明らかにした。これは、DNAの塩基配列にAとTが繰り返し配列されるとアクリルアミドゲル中では泳動が遅くなるためである。従って実際の塩基数よりも大きく判定されてしまい、個人識別には極めて危険である事を指適した。

More than 200 people's blood and DNA were extracted. The synthesis conditions, PCR reaction conditions, thermal variability, and temperature conditions of various PCR assays (HLA-DQA1, HLA-DPB1, MCT 118, YNZ 22, Apo B, Col2A) were discussed. Most of the time, MCT 118 was identified, and the Japanese were excluded. The frequency distribution of Apo B is Japanese polytype. YNZ 22 is polytype. YNZ 22 is polytype. Polytype analysis of HLA DQA1 and DPB1 was performed by PCR-RFLP method, DQA1 and DQA1-0301 were performed by PCR-RFLP method. One side, DPB1, 0501 type, 11 type, 11 type 11. In general, PCR polymorphism analysis methods include DNA amplification, sample electrophoresis, and detection. The result of the analysis is extremely incorrect. In the future, the frequency of the analysis results will not be changed. The DNA sequence A and T are aligned. The number of people who are in danger is determined by the number of people who are in danger.