蛍光標識プライマーを用いたPCR法によるDNA多型解析

使用荧光标记引物的PCR方法进行DNA多态性分析

• 批准号: 06670453
• 负责人: 福島 弘文
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670453/
• 关键词: PCR; 蛍光色素; 増幅; 多型; プライマー; 親子鑑定; DNA タイピング; ラダーマーカー

FAXとHEXの蛍光色素をMCT118プライマーの5′末端にそれぞれ標識し、PCRの増幅を行った。用いたDNA試料はすでにアリル決定されたものであり、16〜35アリルまでの増幅を試み、アレリックラダーマーカーを作製した。またRoxでラベルしたスタンダードを用いて、DNAシークエンスゲル泳動を行い、GENESCANソフトで解析したところ、600bp以下ではほぼ正確な塩基数が測定された。しかし600〜800bpのアリルは3〜8bpの誤差が認められるが、アリル間の塩基数の差は16bpであることから、アリル決定には問題はない。次に同一試料でFAM標識とHEX標識の泳動差を検討した。その結果1bp以下の誤差であることからラダーマーカーを用いた未知検体の型判定には極めて有効であることが証明された。STRシステムのSE33の増幅にもFAMとHEXをそれぞれ5′末端に標識したプライマーを用いた。MCT118システムと同様にアレリックラダーを作製し、検体試料をHEXで標識し型判定を行った。2色の蛍光標識による型判定は極めて正確に出来ることが判明した。また銀染色によるバンドの検出よりもはるかに検出感度が高くDNAとして100bgの量まで検出可能であった。

FAX HEX pigment MCT118-terminal marker, PCR amplification DNA samples were used to determine the amplitude of the sample. Rox is the most accurate method for determining the base number of DNA fragments. Genescan is the most accurate method for analyzing DNA fragments. Genescan is the most accurate method for determining the base number of DNA fragments. From 600 bp to 800bp, the error between 3 bp and 8 bp is 16 bp, and the error between 3 bp and 8 bp is 16bp. The difference between FAM logo and HEX logo of the same sample is discussed. The error of the result is less than 1 bp. The amplitude of STR 33 is increased by FAM and HEX. MCT 18 is the same type of sample as HEX. 2. The color of the light mark is determined by the type of light. Silver stain detection is highly sensitive to DNA up to 100bg.

项目成果

勝山善彦: "迅連増幅法によるDNA多型分析" 法医学の実際と研究. 37. 33-37 (1994)

胜山义彦：“利用快速连续扩增法进行DNA多态性分析”《法医学实践与研究》37. 33-37 (1994)。

福島弘文: "テキスト法医学 分担:親子鑑別" 南山堂, (1994)

福岛博文：《文本法医学科：亲子鉴定》 Nanzando，（1994）

原島規吉: "MCT118のInteralleleについて" DNA多型. 2. 74-76 (1994)

Kiyoshi Harashima：“关于 MCT118 的等位基因”DNA 多态性 2. 74-76 (1994)。

Sugiyama.E: "Allele freguency distribution of the DIS80(pMCT118)locus polymorphism in the Japanese population by PCR" Int J Leg Med. 106. 111-114 (1993)

Sugiyama.E：“通过 PCR 检测日本人群中 DIS80(pMCT118) 位点多态性的等位基因频率分布”Int J Leg Med。

福島弘文: "テキスト法医学 分担:物体検査" 南山堂, (1994)

福岛博文：“文本法医学部门：物体检查” Nanzando，（1994）