抗血小板血栓剤の開発を目的とした血小板粘着反応の分子機作の解析

分析血小板粘附反应的分子机制，开发抗血小板血栓药物

• 批准号: 03670505
• 负责人: 藤村 〓博
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670505/
• 关键词: botrocetin; von Willebrand factor; GPIb; GPII b; IIIa; dispase; bothrombin; シアール酸; SS結合; フオン ビルブランド因子; GPIIb; リストセチン; ボトロセチン; ボトロンビン; 血小板粘着反応; フォンビルブランド因子; 抗GPIbモノクロナ-ル抗体

1)Botrocetinの純化,モノクロナール抗体の作成とそのエピトープ解析:既に確立した方法(Biochemistry 30:1957-1964,1991)で数+mg単位のbotrocetin(von Willebrand因子に結合し,血小板凝集活性を示す蛇毒蛋白)を仰化し,ひき続き抗botrocetinモノクロナール抗体を作成したところ,BCI-7と名づけた抗体がこのvWF-botrocetin結合反応を特異的に阻害すること,この抗体のエピトープはbotrocetinのサブトライシン消化物の25KDdフラグメント上にあること。またBCI-7はヒト胎盤抽出液中の130KDd,〜30KDd,15kDdの三つのbandと交叉反応を当する事を確認し,現在これら蛋白の仰化・精製中である。2)Bothrombinの純化・機能解析:Bothrops jararaca粗毒よりbothrombinと名づけたfibrinogen凝固蛋白を精製した。Bothrombinはヒトthrombinとは異なり,血小板を直接凝集せしめることはないが,外国製fibrinogen存在下にヒト血小板を凝集せしめる事,またこの凝集はPGE_1,EDTA,またGPII b/IIIaモノクロナール抗体CP-8で阻害され,さらにthrombinのGPIbへの結合を阻害するまえGPIbモノクロナール抗体LJ-Ib10で阻害される事より,bothrombinは先ずGPIbに結合し,更にGPII b/IIIaを活性化せしめるsignal transductorとしての作用を有する事を明らかにした(Biochemistry 33:1843-1849,1993)。3)39/34・KDd-vWF dispase fragmentにおけるCys^<509>-Cys^<695>と糖鎖〓役割: GPIb結合ドメイン機能を有する最小限のvWF dispase fragment(Subunitのアミノ酸残基480/481-781)に還え・アルキル化処理あるいはノイラミニダーゼ処理(脱シアル酸化)を加え,^<125>I-vWFとGPIbの結合ならびに高ズリ応力下の血小板凝集がどのような作用を受けるかを検討し,39/34kDa-fragment内のCys^<509>-Cys^<695>のSS結合の存在とO-linked糖鎖の存在はvWF-GPIb結合反応を阻害する方向(downregulate)する事を発見した(Miura et al.Blood 投稿中.1994)。

1) Botrocetin antigenization, antithrombotic antibodi, antisera, anti-botrocetin antibodies, antisera, antisera. BCI-7 antibody antibody vWF-botrocetin combined with anti-virus antibody, antibody vWF-botrocetin combined with anti-virus antibody 30KDd, 15kDdd, 30KDd, 15kDdl, 30KDd, 15kDd3, band, 30kDd, 15kDdd, 30KDd, 15kDdd, 30KDd, 15kDdd, 30KDd, 15kDdd, 30kDd, 15kddd, 30kdd, 15kddd, 30kdd, 15kddd, 30kdd, 15kddd, 30kdd, 15kddd, 30kDd, 15kddd, 30kDd, 15kDddd, 30kDd, 15kddd, 30kDd, 15kDdd, 30kDd, 15kDdd, 30kDd, 15kDddd, 30k 2) Bothrombin chemical analysis: Bothrops jararaca crude toxin, bothrombin, fibrinogen coagulant protein, fibrinogen. Bothrombin, direct thrombin, platelet direct GPIb, foreign fibrinogen, platelet agglutination, platelet agglutination, PGE_1,EDTA, thrombin, GPIb, anti-GPIb, anti-platelet, anti-platelet, platelet, The combination of bothrombin and GPIb is more important for the activation of GPII b/IIIa. The effect of signal transductor is better than that of Biochemistry 33. 3) 39X 34 KDd-vWF dispase fragment Cys ^ & lt;509>- Cys ^ & lt;695> Sugar cut: combined with GPIb, there is a minimum limit of vWF dispase fragment (the acid residue of Subunit acid is 480ppm). The effect of I-vWF GPIb combined with high stress on platelet aggregation was affected by thrombocytopenia. In 39/34kDa-fragment, there was an O-linked glycoprotein in Cys ^ & lt;509>- Cys ^ & lt;695> SS. There was an anti-vWF-GPIb binding in the direction of vWF-GPIb binding (downregulate). Please see the report (in Miura et al.Blood contribution. 1994).

项目成果

S.Nishida et al.: "Purification and Characterization of Bothrombin,a Fibrinogen-Clotting Serine Protease from the Venom of Bothrops jararaca" Biochemistry. 33. 1843-1849 (1994)

S.Nishida 等人：“Bothrombin 的纯化和表征，Bothrombin 是一种来自 Bothrops jararaca 毒液的纤维蛋白原凝固丝氨酸蛋白酶”生物化学。

Kenji Nishio et al.: "Anti-platelet glycoprotein Ib monoclonal anti body (OP-F1) tolally abolisaes ristocetin-induced von Willebrand facter binding,but has mininal effect on the botrocetir-induced binding" Haemostasis. 21. 353-359 (1991)

Kenji Nishio 等人：“抗血小板糖蛋白 Ib 单克隆抗体 (OP-F1) 完全消除瑞斯托菌素诱导的冯维勒布兰德因子结合，但对 botrocetir 诱导的结合影响极小”止血。

Eri Yoshida et al.: "Alboaggregin B and Botrocetin,two snake venom proteins with highly homologous amino acid sequences but totallydistinct functions on von Willebrand factor binding to platelet" Biochemica Biophysics Reseurch Communication. (1993)

Eri Yoshida 等人：“Alboaggregin B 和 Botrocetin，两种蛇毒蛋白，具有高度同源的氨基酸序列，但在冯维勒布兰德因子与血小板结合方面的功能完全不同”Biochemica Biophysicals Research Communication。

Y.Usami et al: "Primary structure of two-chain botrocetin; a von Willebrand factor modulator purified from the venom of Bothrops jararaca" Proc Nat1 Acad Sci USA. 90. 928-932 (1993)

Y.Usami 等人：“双链 botrocetin 的一级结构；从 Bothrops jararaca 毒液中纯化的冯维勒布兰德因子调节剂”Proc Nat1 Acad Sci USA。

K.Nishie,Y.Fujimura,S.Nishida,I.Takeda,A.Yoshioka,H.Fukui,Y.Tomiyama,Y.Kurata: "Antiplatelet glycoprotein Ib Monoclonal antibody (OpーF1) tolally abolisks listcetinーinduced von Willebrand factor binding,but has minimal effect on the botrocetinーinduced bind

K. Nishie、Y. Fujimura、S. Nishida、I. Takeda、A. Yoshioka、H. Fukui、Y. Tomiyama、Y. Kurata：“抗血小板糖蛋白 Ib 单克隆抗体 (Op-F1) 完全消除 listcetin 诱导的血管性血友病因子结合，但对 botrocetin 诱导的结合影响极小