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PCR法を用いたマウス接触過敏症におけるγδ型T細胞レパ-トリ-の解析

PCR法分析小鼠接触性超敏反应中的γδT细胞库

基本信息

批准号：
03670523
负责人：
島田眞路
金额：
$ 1.22万
依托单位：
山梨医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670523/
关键词：
接触温敏症 T細胞レセプタ-γδT細胞 PCR Vγ,δレパ-トリ-

项目摘要

マウス接触過敏症におけるγδT細胞の役割を解析するために,その数の変動とVγ,Vδレパ-トリ-を決定することを目的として実験を行った。接触過敏症において主たる役割をもつ抗原特異的なeffectorT細胞はαβ型であるが,その初期段階におけるγδT細胞の役割はまだ知られていない。マウス接触過敏症の系は通常のTNCB,DNCB,FITCの系を用いた。Induction phaseにおいてはその所属リンパ節を継時的に抗原塗布後0,12,24,48時間後に採取し,TCRγδ抗体(UC7ー13D5,GL3)を用いて染色し,FACSにてγδT細胞数を算定した。また同時にmRNAを調整後,Cγ,Cδのプライマ-を用いて逆転写酵素によりcDNAを作製し,各種Vγ,Vδのプライマ-を用いてPCRを行い,Southern blotによりVγ,Vδのレパ-トリ-の決定を行った。またEffector phaseにおいてはハプテン塗布後の耳介皮膚(1回の実験あたり各ハプテン10匹ずつ)を0,6,12,24時間後に採取,リンパ節と同様の方法でVγ,Vδレパ-トリ-の決定を行った。Induction phaseのリンパ節のリンパ球数のなかにしめるγδT細胞は1〜3%で継時的な変動は認められなかった。またVγ,Vδのレパ-トリ-はVγ1,2,4,7,Vδ1,2,4,5,7であり,これも正常対照群との差異は認められなかった。Effector phaseの皮膚浸潤細胞のPCRの結果では,0,6,12,24時間後ともVγ1,5,Vδ1,2,5,6,7が認められ,特に変化は認められなかった。Thyー1^+樹枝状表皮細胞数にも変化がなく,PCR法でもVγ_5,Vδ_1細胞が認められた。これらの結果を総合すると,マウス接触過敏症においてはInduction phase,Effector phaseとも特定のγδT細胞の関与は否定的である。ただし今回のわれわれの解析はVγ,Vδレパ-トリ-をPCR法にて定性的に行ったが,今後より定量的に解析することが必要と思われる。さらに各種Vγ,Vδ領域に対するモノクロ-ナル抗体の開発により,さらに詳細に解析していく予定である。

After exposure to allergies, γ δ T cells were used to analyze the effects of allergies, V γ, V δ, V, V, When exposed to allergies, effectorT cell α β specific antigen was cut, and γ δ T cells were cut in the early stage. Contact allergy is usually caused by TNCB,DNCB,FITC. The antigens of Induction phase were collected after 1224 and 48 hours, and the TCR γ δ antibodies (UC7-13D5, GL3) were stained with FACS-γ T cells. After the simultaneous mRNA adjustment, C γ, C δ, the enzyme reverse enzyme, the cDNA, the V γ, V δ, Southern blot, V γ, V δ, respectively. This is the first time to use the same method as V γ, V δ Y, V δ Y, V δ, V, V, γ, V, V, γ, V, δ, V, γ, V Induction phase makes sure that the number of balls is higher than that of γ δ T cell at the temperature of 13.3%. "V γ, V δ", "V γ", "V γ 1", "2", "4", "7", "V δ 1", "2", "4", "V δ 1", "4", "5" and "7", "normal", "normal", "poor", "poor" and "poor". The results of Effector phase skin immersion cell PCR test results show that after 12 hours of 12 minutes of 24 hours, V γ 1, 5, 5, 1, 2, 5, 6, 7, 4, 4, 6, 6, 6, 4, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6 The number of cells in the dendritic epidermis of Thy 1 ^ + dendritic epidermis was much higher than that of V γ _ 5 and V δ _ 1 cells of PCR method. The results showed that the allergens were in contact with allergies, allergies, Induction phase,Effector phase cells, specific γ δ T cells and negative cells. This time, please analyze the qualitative analysis of V γ, V δ, PCR method, and then make a quantitative analysis of what is necessary. All kinds of V γ, V δ fields are used to determine the level of antibody in the field of anti-virus.