T細胞レセプタ-を介する胸腺細胞の活性化と分化の研究

T细胞受体介导的胸腺细胞活化和分化的研究

• 批准号: 01570265
• 负责人: 斉藤 隆
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 1990
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570265/
• 关键词: T細胞レセプタ-; 胸腺細胞; T細胞活性化; 分化; γδT細胞; CD4^+CD8^+細胞; 遺伝子導入; アンカ-PCR法

1.Gross virusを用いて未熟胸腺細胞の形質転換株を樹立した。主にCD4^-CD8^-であったが、CD4^+CD8^+の株も確立できた。CD4^+CD8^+クロ-ンは、CD3^+、Thy1^+の表面マ-カ-を持つ。T細胞レセプタ-(TCR)mRNA発現ではα鎖、γ鎖の発現はなく、β鎖は1.3と1.0kb、δ鎖は1.3kbのみを発現していた。δ鎖はmRNAからcDNAを作り、アンカ-PCR法からもV領域を含まないDJC再構成産物であることが確認された。細胞表面染色でも、抗β鎖抗体では反応したが、抗δ鎖抗体には反応しなかった。即ち、このクロ-ンはα鎖を伴わないβ鎖を発現しており、β鎖単独または新しいレセプタ-と結合していると考えられる。長期培養するとCD4^+CD8^+→CD4^+CD4^-へと変化し、TCRは変わらないので、分化のモデルとなる。2.リンホカイン依存性の未熟胸腺細胞クロ-ンを確立した。このクロ-ンはCD4^-CD8^-、CD3^+Thy1^+でγδTCRを発現し、抗CD3や抗Thy1抗体の刺激によりILー2、γIFNを産出し、TH1様のリンホカイン産出を示した。他方、限られた腫瘍に対するMHC非拘束性傷害活性も同時に有している。胸腺内に最も早期に出現する、この胸腺γδ細胞がIL-2やγIFNを産出することから、αβT細胞分化を支える役割を果たしていると思われた。3.未熟胸腺上でのレセプタ-発現量がレパ-トリ-形成に重要であり、そのモデルシステムを用いて調べた。TCRの発現のないT細胞変異株を樹立した。この細胞に種々の組合わせのTCRα鎖とβ鎖を遺伝子導入して解析した結果、αβペア-によって細胞表面発現に大きな差のあること、極端な場合にはほとんど表面に現れないことが判明した。さらに、発現していても、低レベルのレセプタ-では抗原刺激に反応せず、抗原に反応するには細胞表面レセプタ-レベルの閾値がある。未熟胸腺細胞のTCRレベルはこの閾値以下であり、αβペア-により発現の悪いT細胞は活性化されない可能性を示唆した。

1.Gross virusを use を て unripe thymocyte <s:1> cytoplasm 転 for strain を to establish <s:1> た. The main にCD4^-CD8^-であったが and CD4^+CD8^+ <s:1> strains establish で た た. The surfaces of CD4^+CD8^+ <s:1> ロ -<s:1>, CD3^+, and Thy1^+ <s:1> hold ロ- カ-を. T cells レ セ プ タ - (TCR) mRNA 発 now で は alpha lock, gamma locking の 発 now は な く, beta locked は と 1.3 1.0 KB, the delta は 1.3 KB の み を 発 now し て い た. Delta lock は mRNA か ら cDNA を り, ア ン カ - PCR method か ら を も V field containing ま な い DJC to form product で あ る こ と が confirm さ れ た. Cell surface staining で で, anti-β -locking antibody で った anti-応 たが, anti-δ -locking antibody に anti-応 な った った. Namely ち, こ の ク ロ - ン は alpha を lock with わ な い beta lock を 発 now し て お り, beta lock 単 alone ま た は new し い レ セ プ タ - と combining し て い る と exam え ら れ る. Long-term culture す る と CD4 + CD4 + CD8 +, CD4 ^ ^ ^ ^ - へ と - し and TCR は - わ ら な い の で, differentiation の モ デ ル と な る. 2. Youdaoplaceholder0, ホカ, ホカ, <s:1> dependent <s:1> immature thymocytes <s:1> ロ- <e:1> を establish <s:1> た. こ の ク ロ - ン は CD4 ^ - CD8 ^ -, CD3 + Thy1 ^ ^ + で gamma delta TCR を 発 し now, anti CD3 や Thy1 antibody resistance の stimulus に よ り IL 2, gamma interferons を output し ー, TH1 others の リ ン ホ カ イ ン output を shown し た. The other party, limited to られた abscess に, has non-restrictive notional activity <s:1> against するMHC and に has る て る る. Thymus に most early も に す る, こ の thymus cells gamma delta が IL - 2 や gamma IFN を output す る こ と か ら, alpha beta T cell differentiation を え る "を cut fruit た し て い る と think わ れ た. 3. Unripe on thymus で の レ セ プ タ - 発 now quantity が レ パ - ト リ - form important で に あ り, そ の モ デ ル シ ス テ ム を with い て adjustable べ た. TCR な occurrence of T-cell variant strains を establishment of <s:1> た. こ の cells に kind 々 の combination わ せ の TCR alpha beta lock lock と を heritage 伝 son import し て parsing し た results, alpha beta ペ ア - に よ っ て cell surface 発 に now big き な poor の あ る こ と, extreme な に は ほ と ん ど surface に れ な い こ と が.at し た. さ ら に, 発 し て い て も, low レ ベ ル の レ セ プ タ - で は antigen stimulation に anti 応 せ ず, antigen に 応 す る に は cell surface レ セ プ タ - レ ベ ル の threshold numerical が あ る. Unripe thymocyte の TCR レ ベ ル は こ の threshold under nt で あ り, alpha beta ペ ア - に よ り 発 is の 悪 い t-cell は activeness さ れ な を い possibility in stopping し た.

项目成果

Ohno,H.,Taniguchi,M.& Saito,T.: "Negative signal transduction through CD2 molecule upon antigen-specific T cell activation." J.Immunol.

大野，H.，谷口，M.

Saito,T.,Ohno,H.,Ushiyama,C.,Taniguchi,M.& Germain,R.N.: "CD2 can mediate TCR/CD3-independent T cell activation." Nature.

斋藤，T.，大野，H.，牛山，C.，谷口，M.

Marusic-Galesic,S.,Saito,T.,Tentori,L.,Zunigapflucker,J.,Raulet, D.H.,Allison,J.P.& Kruisbeek,A.M.: "A novel γδ TCR adds limited diversity to the γδ repertoire in adult thymus" J.Immunol.142. 28 (1989)

Marusic-Galesic, S.、Saito, T.、Tentori, L.、Zunigapflucker, J.、Raulet, D.H.、Allison, J.P. 和 Kruisbeek, A.M.：“一种新型 γδ TCR 为成人胸腺中的 γδ 谱添加了有限的多样性”免疫杂志 142。28 (1989)

Saito,T.& Germain,R.N.: "Marked difference in the efficiency of expression of distinct αβ T cell receptor heterodimers." J.Immunol.143. 3379-3384 (1989)

Saito, T. 和 Germain, R.N.：“不同 αβ T 细胞受体异二聚体的表达效率存在显着差异。”J.Immunol.143 3379-3384 (1989)。

Saito,T.,Pardoll,D.,Fowlkes,B.J.& Bluestone,J.A.: "A murine thymocyte clone expressing γδ T cell receptor mediates cytolytic function against tumors and THI-like lymphokine secretion." Cancer Res.

Saito, T.、Pardoll, D.、Fowlkes, B.J. 和 Bluestone, J.A.：“表达 γδ T 细胞受体的鼠胸腺细胞克隆介导针对肿瘤的细胞溶解功能和 THI 样淋巴因子分泌。”