新規シトクロムP450アイソザイムMALDOの分子レベルにおける反応機構解析

新型细胞色素P450同工酶MALDO的分子水平分析反应机制

• 批准号: 03671071
• 负责人: 山本 郁男
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokuriku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03671071/
• 关键词: aldehyde oxygenase; MALDO; シトクロムP450; cDNAクローニング; トルアルデヒド; トルイル酸; 種差; モルモット; アルデヒド; 酵素誘導; cDNAクロ-ニング; 性差; カルボン酸

Microsomal aldehyde oxygenasa(MALDO)の構造及び機能について検討を行い以下の結果を得た。1)P450MUT-2及びそのBrCN限定分解によって得られたペプチドのN末端アミノ酸配列を決定し、全配列の約1/5に相当する102個の配列を明らかにした。その配列は、ラットのCYP2C7に最も高い相同性(86.7%)が認められ、他にCYPs2C6(84.4%)及び2C11(78.9%)などIIC subfamilyに高い相同性を有する分子種であることがさらに明らかとなった。2)CYP2C7のcDNAをプローブとして129/J及びC57BL/6系雄マウス肝のcDNAライブラリィーをスクリーニングし、各々1.1×10^5及び4.5×10^4個のプラーク中99及び33個のポジティブなプラークの存在を認め、そのうちシグナルの強度が異なる10個についてpBluescriptにサブクローニングした。3)最もサイズの大きいクローン(約1.8kbp)につき一部シークエンスを行ったところ、CYP2C7に高い相同性をもっていたが、その塩基配列より推定されるアミノ酸配列がP450MUT‐2と完全に一致するものでなかったことから、P450MUT‐2類似の分子種であることが明らかとなった。4)MALDOの種差の検討を行い、モルモットより9‐anthraldehydeのMALDO活性において主要な役割を演じていると考えられるP450分子種(P450GPF‐A)を精製した。P450GPF‐AはP450MUT‐2と異なり、11‐O_<xo>‐△^8‐tetrahydrocannabinolのMALDO活性は全く認められず、N末端アミノ酸配列よりIIB subfamilyに属する分子種であることが推定された。5)マウス肝ミクロゾーム中にtolualdehydeに対するMALDOの存在を見いだし、その本体がP450MUT-2であることを明らかにした。6)第一級アミンが酸化的脱アミノ化反応により生成するアルデヒド中間体もMALDOの基質と成り得ることを見いだした。すなわち、メスカリンから生成する3,4,5‐trimethoxyphenylacetaldehydeがMALDO(P450MUT‐2)により、カルボン酸体へと酸化されることを明らかにした。

Microsomal aldehyde oxygenasa(MALDO) <s:1> structure and び function に び て検 て検 て検 を row を the following <s:1> results を た た 1) P450MUT - 2 and び そ の BrCN finite decomposition に よ っ て have ら れ た ペ プ チ ド の N terminal ア ミ ノ acid with column を decided し, with about 1/5 of that column の に quite す る 102 の match column を Ming ら か に し た. そ の column は, ラ ッ ト の CYP2C7 に most high も い identity (86.7%) が recognize め ら れ, he に CYPs2C6 (84.4%) and 2 c11 び (78.9%) な ど IIC subfamily に high い phase gay を す る molecules of で あ る こ と が さ ら に Ming ら か と な っ た. 2) CYP2C7 の cDNA を プ ロ ー ブ と し て 129 / J and び C57BL / 6 male マ ウ ス の liver cDNA ラ イ ブ ラ リ ィ ー を ス ク リ ー ニ ン グ し, various 々 1.1 * 10 ^ 5 and び 4.5 * 10 ^ 4 の プ ラ ー ク in 99 and 33 び の ポ ジ テ ィ ブ な プ ラ ー ク の を recognize め, そ の う ち シ グ ナ ル の strength が different な る 10 に つ い て pBluescript に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し た. 3) the most も サ イ ズ の big き い ク ロ ー ン (about 1.8 KBP) に つ き a シ ー ク エ ン ス を line っ た と こ ろ, CYP2C7 に high い identity を も っ て い た が, そ の salt base with column よ り presumption さ れ る ア ミ ノ acid with column が P450MUT ‐ 2 と に completely consistent す る も の で な か っ た こ と か ら, P450MUT ‐ Similar to である molecular species である とが Ming ら となった となった. 4) MALDO の differentiae の beg を 検 い, モ ル モ ッ ト よ り 9 ‐ anthraldehyde の MALDO active に お い て main cutting を な service play じ て い る と exam え ら れ る P450 molecules of (P450GPF ‐ A) を refined し た. P450GPF ‐ A は P450MUT ‐ 2 と different な り, 11 ‐ O_ < > xo ‐ delta ^ 8 ‐ tetrahydrocannabinol の MALDO active は く all recognize め ら れ ず, N terminal ア ミ ノ acid with column よ り IIB subfamily に genus す る molecules of で あ る こ と が presumption さ れ た. 5) マ ウ ス liver ミ ク ロ ゾ ー ム in に tolualdehyde に す seaborne る MALDO の exist を see い だ し, そ の ontology が P450MUT - 2 で あ る こ と を Ming ら か に し た. 6) the first level ア ミ ン が acidification of ア ミ ノ turn against 応 に よ り generated す る ア ル デ ヒ ド intermediates も MALDO と の matrix into り must る こ と を see い だ し た. す な わ ち, メ ス カ リ ン か ら generated す る three, four, five ‐ trimethoxyphenylacetaldehyde が MALDO (P450MUT ‐ 2) に よ り, カ ル ボ ン acid body へ と acidification さ れ る こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

Kazuhito Watanabe: "Mouse Hepatic Microsomal Oxidation of Aliphatic Aldehydes (C_8 to C_<11>)to Carboxylic Acids" Biochem.Biophys.Res.Commun.188. 114-119 (1992)

Kazuhito Watanabe：“脂肪醛（C_8 至 C_<11>）的小鼠肝微粒体氧化为羧酸”Biochem.Biophys.Res.Commun.188。

山本 郁男: "薬毒物化学試験法と注解(大麻試験法)" 南山堂, 17 (1992)

Ikuo Yamamoto：“药用毒理学化学测试方法和评论（大麻测试方法）” Nanzando，17（1992）

山本 郁男: "大麻成分THC,CBD及びCBNのヒトにおける代謝" 法中毒. 9. 2-16 (1991)

Ikuo Yamamoto：“人类大麻成分 THC、CBD 和 CBN 的代谢”法律成瘾。

Ikuo Yamamoto: "Analysis and pharmacotoxicity of feruloyltyramine as a new constituent and pーcoumaroyltyramine in cannabis sativa L." Pharmacol.Biochem.Behav.40. 465-469 (1991)

Ikuo Yamamoto：“大麻中新成分阿魏酰胺和对香豆酰胺的分析和药物毒性” Pharmacol.Biochem.Behav.465-469（1991）。

渡辺 和人: "大麻成分と他の中枢神経薬との相互作用" 衛生化学. 38. 385-396 (1992)

Kazuto Watanabe：“大麻成分与其他中枢神经系统药物之间的相互作用”卫生化学 38. 385-396 (1992)。