新規アイソザイムP450MUT-2(MALDO)の役割とその反応機構解明

阐明新型同工酶 P450MUT-2 (MALDO) 的作用及其反应机制

• 批准号: 06772161
• 负责人: 松永 民秀
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokuriku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 1995
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772161/
• 关键词: MALDO; P450; CYP2C; CYP2B; クローニング; alleic variant; アルデヒド; 発現調節

新規アイソザイムP450MUT-2(MALDO)の役割とその反応機構解明に関する研究について、以下の点を明らかにした。1) P450MUT-2(CYP2C29)の発現調節:ddN系雄マウスの11-Oxo-Δ^8-tetrahydrocannabinolを基質とした時のMALDO活性は、用いた各種誘導剤中フェノバルビタール処理で対照群の約2倍と有意に誘導されたが、3-メチルコラントレン、デキサメタゾンあるいはアセトン処理では有意な活性の上昇は認められなかった。P450MUT-2(CYP2C29)のタンパク質及びそのmRNA含量は、フェノバルビタール処理においてのみ対照群の約2培増加し、MALDO活性と良い相関が認められた。また、雄雌マウス肝のMALDO活性は、4週齢まで加齢とともに上昇、ミクロソーム中のP450MUT-2(CYP2C29)含量と良い相関を示した。現在、mRNAを分離、その変動について検討中である。2) MALDOの種差:雌ニホンザル肝ミクロソームより、9-アントラアルデヒドのMALDO活性の主要な分子種として、N末端アミノ酸配列から2Bサブファミリーに属することが推定されるP450JM-Cを精製した。3) CYP2C29と高い相同性を有するcDNAのクローニング:CYP2C29をプローブとして、129/J系雄マウス肝のcDNAライブラリーから、全長1718bpのcDNAをクローニングした。その推定されるアミノ酸配列から、N末端側から2残基に相当する6bpを欠いたものであった。このcDNAのCYP2C29との比較では、7塩基の置換が認められ(相同性 99.5%)そのうちアミノ酸の置換は1残基(106Ile→104Met)のみであった。CYP2C29は、C57BL/6Jマウス肝のcDNAライブラリーよりクローニングされたことから、今回得られたクローンは系統の違いによるP450MUT-2のalleic variant(CYP2C29v)と推定された。4) cDNAの発現:P450MUT-2(CYP2C29)cDNAの発現ベクター(pCMV4)組換え体を作製、その方向を制限酵素処理により確認した。現在も本研究は進行中であり、今後COS細胞に導入、その培養細胞を用いてMALDOの性質並びにその反応機構について検討する。

The research on the operation and mechanism of the new regulation P450MUT-2(MALDO) is carried out in the following ways: 1)P450MUT-2(CYP2C29) expression regulation:ddN system male sex of 11-Oxo-Δ^8-tetrahydrocannabinol matrix MALDO activity in response to various inducers in the treatment of the group of about 2-fold intentional induction, 3-fold, 3-fold, 3-fold P450MUT-2(CYP2C29) mRNA content and MALDO activity increased by about 2 times in the treatment group. MALDO activity in the liver of both sexes increased significantly at week 4, and P450MUT-2(CYP2C29) content in the liver of both sexes correlated well. Now, mRNA is isolated, and there are changes in the process. 2)MALDO species: female, 9-terminal, MALDO activity of the main molecular species, N-terminal, acid alignment, 2B, MALDO species, putative P450JM-C purification 3)CYP2C29 cDNA sequence with high homology:CYP2C29 cDNA sequence, 129/J cDNA sequence, 1718 bp cDNA sequence The putative nucleotide sequence is 6bp long and the nucleotide sequence is 2 bp long. A comparison between CYP2C29 and CYP2C29 in this cDNA shows that the substitution of CYP2C29 and CYP2C29 in CYP2C29 is identical (99.5% identity), and the substitution of CYP2C29 and CYP2C29 in CYP2C29 is identical (106Ile→104Met). CYP2C29, C57BL/6J, and its cDNA fragments were identified by the alleic variant of P450MUT-2 (CYP2C29v). 4)cDNA development:P450MUT-2(CYP2C29)cDNA development site (pCMV4) was identified by restriction enzyme processing in the following directions: This study is ongoing and will be conducted in the future to investigate the properties of MALDO and its reaction mechanisms in COS cells and cultured cells.

项目成果

T.Matsunaga: "Metabolism of Δ^9-Tetrahydrocannabinol by Cytochrome P450 Isozymes Purified from Hepatic Microsomes of Monkeys" Life Sciences. (in press). (1995)

T.Matsunaga：“从猴子肝微粒体中纯化的细胞色素 P450 同工酶对 Δ^9-四氢大麻酚的代谢”（正在出版）。

T.Matsunaga: "cDNA Cloning and Sequence of CYP2C29 Encoding P-450 MUT-2,a Microsomal Aldehyde Oxygenase" Biochim.Biophys.Acta. 1184. 299-301 (1994)

T.Matsunaga：“编码 P-450 MUT-2（一种微粒体醛加氧酶）的 CYP2C29 的 cDNA 克隆和序列”Biochim.Biophys.Acta。