磁気効果と発光現象を利用した担癌生体免疫測定システムの開発と総合的な分析

利用磁效应和发光现象开发和综合分析荷瘤生物免疫分析系统

• 批准号: 03671087
• 负责人: 南谷 晴之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03671087/
• 关键词: 単球; 免疫機能; 貧食能; 活性酸素; 磁気泳動細胞分離; Fcレセプタ-; モノクロ-ナル抗体; フロ-サイトメ-タ

ヒト末梢血単球の貧食活性とそれに関わる細胞レベルでの免疫機能について分析した。対象は癌疾患(胃癌、大腸癌、等)のみならず炎症疾患(潰瘍性大腸炎、クロ-ン病、等)についてもその機能評価を試みた。方法としてプロテインAコ-ト磁気ビ-ズ貧食能を磁気泳動細胞分離法により、またプロテインAコ-ト蛍光ビ-ズ貧食能をフロ-サイトメ-タにより測定した。貧食現象に関与する細胞膜のレセプタ-機能(Fcレセプタ-発現量)をFITC標識モノクロ-ナル抗体結合させ、また活性酸素産生量をDCFHーDA細胞内取り込み後のH_2O_2とDCF反応により蛍光発光量を指標として測定した。その結果、次のことが明確に示された。(1)単球の磁気ビ-ズ貧食能は健常者に比べ癌疾患・炎症疾患で大幅に低下する(有意差P<0.01)。(2)蛍光ビ-ズの貧食能も同様に有意な低下(P<0.01)を示した。(3)細胞膜表面のFcレセプタ-発現量は,健常者と炎症疾患で有意差はなく、逆に癌患者で有意に増加した。また、単球表面に存在する2種類のFcレセプタ-の発現量はFcγRII(CD32)がFcγRI(CD64)の約2倍発現することを確認した。(4)Fcレセプタ-発現量と関連するIFNーγ濃度は胃癌においてのみ若干の高値を示したにすぎないが、癌疾患でヘルパ-Tリンパ球の減少が顕著であった。(5)PMA刺激による活性酸素産生量は癌疾患・炎症性疾患で有意に増加する。一方、オプソニン化ザイモザン刺激では癌疾患で高値を示すが有意差はみられない。しかし、クロ-ン病および潰瘍性大腸炎で極めて高い活性酸素産生量を観測した。以上、炎症・癌疾患において貧食活性が有意に低下することが示されたが、Fcレセプタ-発現量との間に有意な相関はみられれず、レセプタ-発現量がそのままレセプタ-機能を表さないと考えられた。一方、活性酸素産生能力は高まっていることが示されたが、貧食刺激による活性酸素産生については貧食機能低下を反映する結果となった。

分析了人外周血单核细胞的凋亡活性和在细胞水平上相关的免疫功能。受试者试图评估不仅癌症疾病（胃癌，结肠癌等）的功能，还可以评估炎症性疾病（溃疡性结肠炎，Cron病等）。作为一种方法，通过磁寄电细胞分离方法测量了蛋白质A涂层磁珠，并通过流式细胞仪测量蛋白质A涂层荧光珠。与PALPITITION现象有关的细胞膜的受体功能（FC受体表达水平）与FITC标记的单克隆抗体相连，并通过H_2O_2和DCF Incorpiation h_2O_2和DCF Incorpiation in Index来测量产生的活性氧的量。结果清楚地指出：（1）与健康个体相比，癌症和炎症性疾病中单核细胞的磁圈能力显着降低（显着差异P <0.01）。 （2）荧光豆的摄入能力不足也显示出显着降低（p <0.01）。 （3）健康个体和炎症性疾病之间细胞膜表面上的FC受体表达水平没有显着差异，相反，癌症患者中的FC受体表达水平显着增加。此外，已经证实，单核细胞表面上两种类型的FC受体的表达水平大约是FcγRII（CD32）的两倍（CD64）。 （4）尽管与FC受体表达水平相关的IFN-γ浓度在胃癌中仅略高，但癌症疾病中辅助-T淋巴细胞的降低是显着的。 （5）PMA刺激产生的活性氧量在癌症和炎症性疾病中显着增加。另一方面，调子化的Zymozan刺激在癌症疾病中显示出很高的水平，但没有看到显着差异。但是，在Cron病和溃疡性结肠炎中观察到极高的活性氧。以上表明，炎症和癌症疾病的饮食不良活性显着降低，但是在FC受体表达水平之间没有观察到显着相关性，并且人们认为受体表达水平的活性并未直接代表受体功能。另一方面，结果表明，产生活性氧的能力正在增加，但是结果反映出由于刺激不良的饮食而产生活性氧的不良饮食功能的下降。

项目成果

Minamitani H,Tomii Y.& Sadahiro S: "Magnetophoretic measurement of mononuclear cell phagocytosis of digestive cancer diseases" Proc.12th Ann.Int.Conf.IEEE Eng.Med.& Biol.Soc.4. 1592-1593 (1990)

南谷 H、富井 Y.

富井 靖志,貞広 荘太郎,南谷 晴之: "磁気泳動細胞分離法による末梢血単球貧食能の測定" 電子情報通信学会技術報告. MBE90ー8. 53-60 (1990)

Yasushi Tomii，Sotaro Sadahiro，Haruyuki Minamitani：“磁泳细胞分离法测量外周血单核细胞吞噬作用”IEICE MBE90-8（1990）。

南谷 晴之,富井 靖志,下村 卓司,貞広 荘太郎,岡田 英史: "磁気効果を利用したヒト単球貧食能の測定法" 計測自動制御学会論文集. 28. 464-471 (1992)

Haruyuki Minamitani、Yasushi Tomii、Takashi Shimomura、Sotaro Sadahiro、Hidefumi Okada：“利用磁效应测量人类单核细胞寡噬的方法”仪器与控制工程师协会会议记录 28. 464-471 (1992)。

富井 靖志,貞広 荘太郎,南谷 晴之: "磁気泳動細胞分離法による単球の磁気ビ-ズ貧食能評価" 日本生体磁気学会誌. 3. 191-192 (1990)

富井靖、贞博正太郎、南谷春之：“利用磁泳细胞分离法评估单核细胞的吞噬能力”日本生物磁学学会杂志 3. 191-192 (1990)。

富井 靖志,西河 真由美,貞広 荘太郎,南谷 晴之: "磁気応用によるヒト白血球機能の分析" 第5回生体生理工学シンポジウム論文集. 77-80 (1990)

Yasushi Tomii、Mayumi Nishikawa、Shotaro Sadahiro、Haruyuki Minamitani：“通过磁性应用分析人类白细胞功能”第五届生物生理工程研讨会论文集77-80（1990）。