磁気および発光プローブを用いた担癌生体免疫能分析システムの研究

磁发光探针荷瘤生物免疫功能分析系统研究

• 批准号: 04671398
• 负责人: 南谷 晴之
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04671398/
• 关键词: 単球; 免疫; 貧食能; 活性酸素; Fcレセプター; モノクローナル抗体; フローサイトメータ; 磁気泳動細胞分離

本研究ではヒト末梢血単球の貧食活性とそれに関わる細胞レベルでの免疫機能について,以下の方法で総合的に分析できるシステムを構築し,その有効性を確認した.(1)プロテインAコート磁気ビーズ貧食能を分析する磁気泳動細胞分離法,(2)プロテインAコート蛍光ビーズ貧食能を分析するフローサイトメータ法,(3)貧食現象に関与する細胞膜のレセプター機能(Fcレセプター発現量)をFITC標識モノクローナル抗体で分析するフローサイトメータ法,(4)DCFH-DA細胞内取り込み後のH_2O_2とDCF反応による蛍光発光量で活性酸素産生量を測定するフローサイトメータ法,(5)上記の活性酸素産生量を蛍光画像の可視化で分析する共焦点レーザー走査顕鏡画像処理法である.癌疾患(胃癌,大腸癌,等)および炎症疾患(潰瘍性大腸炎,クローン病,等)を対象にその機能評価を試みた結果,次のことが明確に示された.(1)単球の磁気ビーズおよび蛍光ビーズ貧食能は健常者に比べ癌疾患・炎症疾患で大幅に低下する.(2)細胞膜表面のFcレセプター発現量は,健常者と炎症疾患で有意差はなく,癌患者で有意に増加した.また,FcγRII(CD32)レセプターはFcγRI(CD64)の約2倍発現することを確認した.(3)PMA刺激による活性酸素産生量は癌疾患・炎症性疾患で有意に増加する.オプソニン化ザイモザン刺激では癌疾患で高値を示す.とくにクローン病および潰瘍性大腸炎で極めて高い活性酸素産生量を観測した.(4)蛍光画像可視化による活性酸素産生量の定量化でも同様の結果が得られたが,とくに細胞内の食胞近傍の産生量増加の局在性が観測された.以上,炎症・癌疾患において貧食活性が有意に低下するが,逆に細胞内の活性酸素産生能力は高まっていることが示された.一方,Fcレセプター発現量との間に有意な相関はみられず,レセプター発現量がそのまま貧食機能を表さないと考えられた.

在这项研究中，我们构建了一个系统，该系统可以全面分析人类外周血单核细胞的触诊活性以及使用以下方法涉及其细胞水平的细胞免疫功能，并确认其有效性。 （1）分析蛋白A包膜磁珠的差异性的磁性细胞分离方法，（2）流式细胞仪方法分析蛋白A型荧光珠的差异性较差的特性性，（3）分析与细胞膜中的受体受体功能（FC受体表达水平）分析fitcitiment fitcodiment fitc，fitc的拟合仪表仪，并分析与细胞膜中的fitcodiment seartimennes contiment pertodiment seartiment sembranes pertodiment pertodiment pertodimentimentimentips。方法，（4）流式细胞仪法，该方法使用DCF吸收后H_2O_2和DCF反应引起的荧光发射量来测量活性氧的量，（5）共焦激光扫描成像方法，该方法分析了上述通过可视化荧光图像所描述的活性氧的量。尝试评估癌症疾病（胃癌，结肠癌等）和炎症性疾病（溃疡性结肠炎，克罗恩病等）功能的尝试的结果清楚地表明：（1）比起癌症和炎症个体，单核细胞的磁珠和荧光均可降低单核细胞的饮食。 （2）健康个体和炎症性疾病之间的FC受体表面上的表达水平没有显着差异，并且癌症患者的表达水平显着增加。我们还证实，FcγRII（CD32）受体的表达约为FcγRI（CD64）的两倍。 （3）PMA刺激产生的活性氧量在癌症和炎症性疾病中显着增加。调子Zymozan刺激显示癌症疾病的水平很高。尤其是克罗恩病和溃疡，我们观察到肿瘤结肠炎中的活性氧产量极高。 （4）通过可视化荧光图像来量化活性氧的量时获得了相似的结果，但是观察到细胞中吞噬细胞附近产量增加的定位。这表明，尽管炎症和癌症疾病中可食用的活性较差可显着降低，但在细胞中产生活性氧的能力会增加。另一方面，与FC受体表达水平没有显着相关性，并且认为受体表达水平并不直接代表可食用的功能不佳。

项目成果

富井 靖志,貞広 荘太郎,南谷 晴之,園田 啓: "蛍光プローブを利用したヒト単球機能の測定と分析" 電子情報通信学会技術報告. MBE91-53. 1-8 (1991)

Yasushi Tomii、Shotaro Sadahiro、Haruyuki Minamiya、Kei Sonoda：“使用荧光探针测量和分析人类单核细胞功能”MBE91-53（1991）。

富井 靖志,藤木 秀武,貞広 荘太郎,南谷 晴之: "磁気効果を利用したヒト単球貧食能評価法と臨床応用" 第2回日本生体防御学会学術集会抄録集. 50-51 (1991)

Yasushi Tomii，Hidetake Fujiki，Shotaro Sadahiro，Haruyuki Minamitani：“利用磁效应的人类单核细胞寡噬评估方法和临床应用”第二届日本生物防御学会会议记录50-51（1991）。

富井 靖志,南谷 晴之,貞広 荘太郎,園田 啓: "蛍光プローブを利用したヒト単球活性酸素産生能の評価と検討" 日本炎症学会誌「炎症」. 13. 35-41 (1993)

富井靖、南宫春之、定广正太郎、园田圭：“利用荧光探针对人类单核细胞活性氧产生能力的评价和研究”日本炎症学会杂志，“炎症”13. 35-41（1993）。

富井 靖志,貞広 荘太郎,南谷 晴之,川合 陽子: "貧食現像におけるヒト単球機能(活性酸素産生、表面レセプター)の評価・検討" 第12回日本炎症学会予稿集. 150- (1991)

Yasushi Tomii、Sotaro Sadahiro、Haruyuki Minamitani、Yoko Kawai：“厌食症发展中人类单核细胞功能（活性氧产生、表面受体）的评估和研究”第 12 届日本炎症学会会议记录 150-（1991）。

南谷 晴之,富井 靖志,貞広 荘太郎,岡田 英史: "磁気効果を利用したヒト単球貧食能の測定法" 計測自動制御学会論文集. 28. 464-471 (1992)

Haruyuki Minamiya、Yasushi Tomii、Shotaro Sadahiro、Hidefumi Okada：“利用磁效应测量人类单核细胞寡噬的方法”仪器与控制工程师学会会议记录 28. 464-471 (1992)。