脊椎動物細胞におけるミオシンIおよびミオシンI様蛋白質の存在と機能の解析

脊椎动物细胞中肌球蛋白 I 和肌球蛋白 I 样蛋白的存在和功能分析

• 批准号: 03640621
• 负责人: 大室 弘美
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03640621/
• 关键词: ミオシン分子種; ミオシンI; 好中球; ピロリン酸ゲル電気泳動

脊椎動物におけるミオシンIおよびミオシンI様蛋白質の存在と機能について解析することを目的として、本年度はヒト、ブタおよびモルモットの好中球を材料として以下のことを行った。ミオシンIは低イオン強度で可溶性であるが、細胞の機能発現時には不溶性の膜分画に移行する可能性が高い。そこで、細胞機能静止時と機能時(遊走時、活性酸素生成時)の好中球を生理的イオン強度で破砕し、可溶性分画と不溶性分画に分けてミオシン分子種とその動態について電気泳動およびイムノブロットを用いて検討した。細胞破砕は機能静止時の細胞に活性酸素生成を起こさせないような短時間の超音波処理により行った。各分画と、抗DictyosteliumミオシンI重鎖抗体、抗ラット子宮平滑筋および抗砂嚢平滑筋ミオシンII重鎖抗体の反応性をイムノブロットで調べた。抗ミオシンI抗体は、機能静止時の好中球の可溶性分画の約230Kdペプチドと反応したが、これは不溶性分画にほとんど存在せず、細胞機能時に局在の変化は見られなかった。報告されているミオシンI重鎖は120Kd付近であること、含量が比較的多いこと、ミオシンを非変性状態で特異的に電気泳動するピロリン酸ゲル電気泳動(PPi PAGE)でミオシン(ミオシンIも解析可能である)の挙動を示さないことなどから、このペプチドがミオシンIである可能性は低い。また、2種の抗ミオシンII重鎖抗体による解析で、細胞機能静止時にはミオシンIIは可溶性分画に70%以上存在するが遊走により可溶性分画から不溶性分画に移行し、存在比は1:1に変化することが明らかになった。これはミオシンIIの遊走への関与を支持するデ-タである。このようなミオシンIIと同様な挙動を示す分子量約140KdのペプチドをPPi PAGEで検出しており、報告されているミオシンIより分子量は大きいがミオシン分子種であることを示唆するデ-タを得ており、さらに解析を進めるためこのペプチドを精製中である。

Vertebrate protein analysis of the existence and function of the protein, this year's report, the report of the good ball material In addition, the solubility of the cell is low, and the function of the cell is high. When the cell function is static and when it is functional (when it is moving, when it is active acid production), it is good for the ball to be physiological. The strength of the ball is broken, the solubility is separated, the insoluble is separated, the molecular species is separated, and the dynamic is separated. The electrophoresis is also discussed. Cell breakdown function is static when the cell active acid production is started, and the ultrasonic treatment is carried out for a short time. The anti-tumor properties of anti-Dictyostelium I re-locking antibody, anti-uterine smooth muscle and anti-sand smooth muscle II re-locking antibody were investigated. The soluble fraction of the anti-MHI antibody is about 230Kd when it is at rest, and the insoluble fraction is about 20 Kd when it is at rest. The report shows that the probability of re-locking is relatively low, and the probability of re-locking is relatively low, because the content of re-locking is close to 120Kd. 2 kinds of anti-Cistin II re-locking antibody analysis, cell function static, Cistin II soluble fraction more than 70% of the existence, migration, existence ratio of 1:1, change, change. This is the first time I've ever seen you. The molecular weight of the protein is about 140Kd, and the protein is purified by PPi PAGE.

项目成果

TatanoーOhmuro,H.,Kaneda,M.,Kakinuma,K.,Kohama,K.& Endo,M.: "Myosin isoforms and their localization in cytosol and membrane fractions of peritoneal neutrophils from Guinea pig." Zoological Science. 8. 1131 (1991)

Tatano-Ohmuro, H.、Kaneda, M.、Kakinuma, K.、Kohama, K. 和 Endo, M.：“豚鼠腹膜中性粒细胞的肌球蛋白同种型及其定位”8。 .1131 (1991)

Kohama,K.,Lin,Y.,Takano=Ohmuro,H.,& Ishkawa R.: "Myosin Iーlike protein from smooth muscle" Journal of Cell Science. 14. 59-61 (1991)

Kohama, K.、Lin, Y.、Takano=Ohmuro, H. 和 Ishkawa R.：“来自平滑肌的肌球蛋白 I 样蛋白”《细胞科学杂志》14. 59-61 (1991)。