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細胞内pH調節異常による細胞のがん化と遺伝子発現異常の分子機構

细胞内pH失调导致细胞癌变和基因表达异常的分子机制

基本信息

批准号：
04152082
负责人：
金沢浩
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152082/
关键词：
細胞がん化がん遺伝子 Na Hアンチポーター遺伝子発現制御 pH調節細胞増殖

项目摘要

本年度は研究課題の展開にあたり基礎となる次の3つの研究を行った。1)細胞内pH異常による細胞がん化と遺伝子発現調節の関係を解析するモデル系の確立:細胞がん化にともない発現誘導されるラットのストロメリシン遺伝子のプロモーター領域の発現調節に与るシスおよびトランス因子を解析した。この結果、-100および-128領域に新たなシス因子を見い出した。-100領域には、ラット繊維芽細胞由来の32Kdの、またトランスフォームした細胞由来では60Kdのトランス因子が結合することが明かとなった。種々の解析から、両タンパク質は同一の構造を持つが、トランスフォーメーションにより一部構造変化がおこり見かけの分子量が変化するものである事が明かとなった。スプライシングの変化の可能性が高い。2)大腸菌Na/Hアンチポーター遺伝子の動物細胞での発現系の確立:大腸菌のNa/Hアンチポーター遺伝子はイニシエーションコドンがGTGであったので、部位特異的変異法でATGに換えた遺伝子を作製し、MMTVのLTRをプロモーターとする発現ベクターを構築した。現在、ラットの繊維芽細胞に導入して細胞の増殖とトランスフォーメーションについて解析中である。3)Na/Hアンチポーター遺伝子のクローニングと抗体の作製:酵母菌に遺伝子バンクを導入して、アルカリ耐性株を分離した。この中から現在Na/Hアンチポーター遺伝子クローンをもつ候補1株を得て解析中である。また、ラットのアンチポーターの遺伝子(NHEI、およびNHE3)のタンパク質を大腸菌で産生し、現在抗体を調製中である。

This year's research topics are carried out in three basic ways. 1)Analysis of the relationship between cell growth and gene expression regulation in abnormal intracellular pH: analysis of cell growth and gene expression regulation in abnormal intracellular pH: analysis of cell growth and gene expression factors This result,-100-128 100 field, cell origin, 32Kd, cell origin, 60Kd, cell origin, cell The analysis of species, molecular weight, and structure of the same species. The possibility of changing the profile is high. 2)Establishment of the development system of E. coli Na/H complex gene in animal cells: construction of the development system of E. coli Na/H complex gene in GTG, site-specific variation of ATG complex gene, MMTV LTR complex gene. Now, we can analyze the growth and development of cell in vitro. 3) Preparation of Na/H mutant and antibody: yeast mutant was introduced and resistant strains were isolated. A candidate for the analysis of Na/H is available. The production of E. coli and the modulation of antibodies in E. coli were studied.