活性酸素による生体障害を抑制する微生物代謝産物の探索

寻找抑制活性氧引起的生物损伤的微生物代谢物

• 批准号: 05856027
• 负责人: 森光 康次郎
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05856027/
• 关键词: 微生物代謝産物; 活性酸素消去物質; N-アセチルチラミン

静岡等の土壌より放線菌655株とカビ60株を分離した。Bennet培地(放線菌)とCzapek-Dox培地(カビ)で4日間振とう培養し得られた濾液とその抽出物について、以下の2つの方法により活性酸素消去物質の探索を行った。1.本研究の実施計画に従い、まず放線菌325株、カビ60株について第1次スクリーニングを行った。鉄-アスコルビン酸系またはヘマチン-過酸化水素系を活性酸素生成源とし、これと微生物代謝物産を枯草菌を生育させたシャーレ上でペーパーディスクにて対峙させた。その結果、両系に対して枯草菌の死滅を強く抑制した物質を生産する放線菌4株、カビ2株を選び出した。その中から、抑制活性が特に強く物質生産量の多いUSF-319株について検討した。319株4Lの培養濾液から活性を有する中酸性抽出物を得、各種クロマトグラフィー(シリカゲル、LH-20、HPLC)により2つの活性酸素消去物質、AR-319a(1.7mg)とAR-319b(4.0mg)を単離した。AR-319bのNMR測定よりC数36個、H数52個が確認されたのみで、構造決定には至らなかった。今後、大量培養と2D-NMR測定やMS測定等により本物質の構造を明らかにし、他の評価系での消去活性も検討していく予定である。2.生体障害の主原因と考えられているOHラジカルの消去物質探索に焦点を置き、Fenton反応(鉄-過酸化水素系)を利用したスクリーニング法を2つ(安息香酸を用いる蛍光法と2-デオキシリボースを用いるTBA法)、上記の方法に加えて残りの放線菌330株について検討した。7株の放線菌培養濾液が、3つのスクリーニング系において活性を示し、特にUSF-580株と786株が活性酸素消去物質を顕著に生産していた。そこで、580株9.75Lの培養液から中性抽出物を得、上記と同様の分離操作により580-A(1.8mg)と580-B(0.8mg)を単離した。その中、580-Aは各種機器分析の結果よりN-アセチルチラミンと決定し、有機合成からもこの構造を確認した。OHラジカル捕捉活性は、DMSOより高くBHTと同程度であった。また、同物質のフェノール性水酸基が活性に関与していることを明らかにした。しかし、酵素系により発生させたスーパーオキサイドの捕捉活性は低かった。

655 strains were isolated from Shizuoka et al. Bennet culture (actinomycetes) and Czapek-Dox culture () 4 days vibration and culture to obtain filtrate and extract, the following 2 methods to explore active acid elimination substances. 1. In this study, 325 strains of actinomycetes and 60 strains of actinomycetes were selected for the first time. Iron-peracid system is the source of active acid production. It is the source of microbial metabolism. The results showed that 4 strains of Bacillus subtilis and 2 strains of Bacillus subtilis were selected from among the four strains of Bacillus subtilis. The production amount of USF-319 strain is mainly due to its moderate and inhibitory activity. 319 strain 4L culture filtrate has active medium acid extract, various kinds of active acid elimination substances, AR-319a (1.7mg) and AR-319b (4.0mg). AR-319b NMR measurements show that there are 36 C numbers and 52 H numbers. In the future, mass culture, 2D-NMR measurement and MS measurement will be used to clarify the structure of this substance, and other evaluation systems will be used to determine the elimination activity. 2. The main causes of biological damage and the elimination of substances were investigated. The focus was set on Fenton reaction (iron-peracidified water system). The method was used to investigate 330 strains of actinomycetes. 7 strains of actinomycete culture filtrate, 3 strains of actinomycete culture system showed activity, especially USF-580 strain and 786 strain produced active acid-eliminating substance. 9.75L of culture medium of 580 strains was obtained from neutral extract, and 580-A(1.8mg) and 580-B(0.8mg) were isolated from the same isolation operation as described above. 580-A is the result of a variety of machine analysis to determine the structure of organic synthesis. OH The same substance and the same nature of the acid group are related to the activity of the acid group. The enzyme system was developed and the capture activity was low.