PCRを用いた国内産 Verticillium属菌の分類

利用 PCR 对国内黄萎病菌进行分类

• 批准号: 05760040
• 负责人: 小池 正徳
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760040/
• 关键词: Verticillium; RAPD; PCR

PCRを利用したRAPD(Random Auplified Polymevphic DNA)法はRFLP分析法に比べ、簡易かつ迅速にDNAの変異を検出できる。そこでまず、Verticillium clahliaeの5つの菌群(A:ナス系、B:トマト系、C:ピ-マン系、D:アブラン科系、E:病原性不明株)の代表となる菌株(農研センター萩原氏より分離)のRAPDの解析を試みた。それぞれの菌株のDNAを抽出し、その各10ngを鋳型として、dNTP200muM、プラズマ-0.2muM、Taqポリメラーゼ2.0unitsを加えた反応液を94℃1分、36℃1分、72℃2分の条件で、40サイクルのPCR判翁を行なった。プライマーには任意の配列からなる10merの20種類の合成プライマー(オペロン社.kit A)を用いた。その結果、20種類のプライマーのうち12種類で増幅されたDNA断片に多型が認められ、供試した5つの菌株の相互の類別が可能であった。次に、DNAの多型を示すバンドの多かったプライマー(Opa-04、10、12)を3種類用いて、V.dahlin(16菌株)、V.alboratrn(4菌株)のRAPDの解析を行ない、バンドの有無でクラスター分析をした。その結果、V.dahlineとValbo atrnはそれぞれクラスターに別れた。V.dahline内も、若干の例外は認められたが、同一菌群でサブクラスターを形成する傾向にあり、本法がVerticillium属菌の分類に有効であることが示された。しかし、プライマー数と菌株数を増やすことにより、さらなる解析が求められる。

RAPD(Random Auplified Polymeric DNA) PCR is a simple and rapid method for detecting DNA variation. RAPD analysis of representative strains of 5 strains of Verticillium clahliae (A: , B: , C: , D: , E: Pathogenic unknown strain)(isolated from the original strain of Agricultural Research Institute). DNA of all strains was extracted, 10ng of each DNA type, 200muM of dNTP,-0.2 muM of Taq, 2.0 units of Taq, 1 min of 94℃, 1 min of 36℃, 2 min of 72℃ and 40 ng of PCR. The composition of 10mer and 20 kinds of kit A can be used in any combination. As a result, the polymorphism of DNA fragments in 20 species and 12 species increased, and the mutual classification of the 5 strains tested was possible. In the second place, RAPD analysis of DNA polymorphism was carried out for three species (Opa-04, 10, 12), V. dahlin(16 strains) and V. alboratrn(4 strains), and RAPD analysis for the presence or absence of DNA polymorphism was carried out. V. dahline Valbo atrn V.dahline, some exceptions, the same flora, the same tendency to form, this method, the classification of Verticillium species, the same tendency. The number of strains increased.

项目成果

Y.Katsumata,M.Koike et al.: "Aeflfa-Varticillium albo-atrann Interactions VII. Selection and claractevization of hith peroxidese cell lines in vesponse to fugl cell well components." Research Bullotin of Obihiro University, Natural Science. 18. 151-156 (1

Y.Katsumata、M.Koike 等人：“Aeflfa-Varticillium albo-atrann 相互作用 VII。选择和澄清 hth 过氧化物酶细胞系对 fugl 细胞孔成分的反应。”

M.Koike,T.Shimada,Y.Anemiya: "Aefalfa-Verticillium albo-atrumInteractions IV. Reactions of alfalfa protoplasts to fuglcultre filtrutes and cell well conpomts" Journal of Japanese society of Grassled Science. 39. 101-107 (1993)

M.Koike，T.Shimada，Y.Anemiya：“Aefalfa-Verticillium albo-atrum 相互作用 IV。苜蓿原生质体对 Fuglcultre 滤液和细胞孔成分的反应”日本草学会杂志。

M.Koike,et al.: "Use of culture filtrutes of Verticillium dahliae as a Bioassy for screering of disease" tolemt eggplant. Plant Tissue Calture Letters. 10. 71-74 (1993)

M.Koike 等人：“使用大丽黄萎病菌的培养滤液作为生物测定来筛选疾病”，以防止茄子。