植物寄生性Verticillium属菌の遺伝子診断
植物寄生黄萎病菌的基因诊断。
基本信息
- 批准号:09760039
- 负责人:
- 金额:$ 1.34万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 1998
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究の目的は土壌中に存在する植物病原菌Verticillium属菌を培養することなしにポリメラーゼ連鎖反応(PCR)の技術を用いて定性的検出を行なうことであった。初年度(平成9年度の成果)真菌類の核およびミトコンドリアリボゾームRNA遺伝子に特異的なプライマーを用いて増幅したDNAを制限酵素処理をしてVerticillium属菌6種(V.albo-atrum,V.dahliae,V.longisporum,V.nigrescens,V.nubilum,V.tricorpus)に特異的なRFLPパターンを見いだした。次年度(平成10年度の成果)Verticillium属菌6種のうち特に日本で被害が多いV.dahliaeに注目し、本菌の汚染土壌を用いて、V.dahliaeをPCRにより検出できるか否かを調べた。1)nested-PCRによる検出まず、Robbら(1991)が開発したV.dahliaeの種特異的なプライマーを用いて、汚染土壌から抽出した土壌バイオマスのDNAを鋳型としPCRによってV.dahliaeのDNAが増幅できるか試みたが、失敗におわった。次に真菌類のリボゾームRNA遺伝子のITS領域を増幅するプライマーにより一次増幅を行い、増幅産物をそのまま鋳型にしてV.dahliae特異的プライマーを二次増幅に用いるnested-PCRを行なったところ、土の生重1gあたり微小菌核3個あれば検出できることがわかった。これは従来の方法で行なうと一ヶ月以上かかる結果を1日でできることに利点がある。1) SSCP法による系統の判別V.dahliaeはナス科植物に対する病原性に基づき大きく4の菌群(A群:ナス系、B群:トマト系、C群:ピーマン系、E群:ナス、トマト、ピーマンには病原性を示さない)からなっており、現在のところまで、トマト系(B群)は遺伝子レベルで他の菌群と異なっていることがわかっており、V.dahliae特異的プライマーによって増幅される内部の遺伝子領域でも一カ所塩基が置換している部位がある。そこで一塩基の違いを検出できるSSCP(Single Strand Conformation Polymorphism)法を試みた。その結果、トマト系ではlパターン、その他の系統では3パターンが検出できた。これらの3パターンの特性については現在調査中である。この方法が確立できれば従来2、3ヶ月かかっていた土壌中に存在するV.dahliaeの菌群(系統)の判別が1から2日のうちに完了できる。
The purpose of this study was to identify the presence of plant pathogens Verticillium in soil by PCR technique. In the first year (results of Heisei 9), specific RFLP of 6 species of Verticillium (V. albo-atrum, V. dahliae, V. longisporum, V. nigrescens, V. nubilum, V. tricorpus) was found in the nucleus of eufungi. Next year (results of Heisei 10) 6 species of Verticillium species were killed in Japan, and V. dahliae was found in contaminated soil. 1) When detected during nested-PCR, Robb (1991) developed the species-specific DNA of V. dahliae and used it to isolate the DNA of V. dahliae from contaminated soil. During PCR, the DNA of V. dahliae increased significantly and failed. The first amplification of the RNA gene in the ITS domain of the secondary fungus was performed by nested-PCR, and the second amplification of the RNA gene in the ITS domain of the secondary fungus was performed by nested-PCR, and the third amplification of the RNA gene in the ITS domain was performed by the secondary fungus. The method of " 1)The systematic determination of the pathogenicity of V. dahliae against plants of the Nasaceae family is based on four groups of bacteria (group A: Nasus, group B: Matot, group C: Paiman, group E: Nasus, Matot, Paiman, which indicate pathogenicity). At present, the Matot group (group B) has a different flora. The internal genetic sub-field of V. dahliae's specific Imaki is expanded, and all parts of the genetic sub-field can be replaced. SSCP(Single Strand Conformation Polymorphism) method is used to detect the presence of a single strand. The result is that the system is not the same as the system. This is the third time in the history of the study. This method was used to determine the presence of V. dahliae in the soil from 2 to 3 months and to determine the presence of V. dahliae from 1 to 2 days.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
小池正徳: "バーティシリウム属菌のゲノム解析" 植物防疫. 52・8. 11-14 (1998)
小池正典:“黄萎病细菌的基因组分析”植物保护52・8(1998)。
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Koike M et.al.: "Genetic relutedness between Japanese and Canadian isulates of plat puthymoic Verticillium spp.based on random cmplified polymorphic DNAs." Advances in Verticillium resarch and disense mangernt. APS press (in press).
Koike M 等人:“基于随机扩增的多态性 DNA,日本和加拿大的扁平黄萎病菌之间的遗传相关性。”
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Wakatabe.D et al: "Vegetative compatibility groups for Japanese isolates of Verticillium dahliae" Mycoscience. 38・1. 17-23 (1997)
Wakatabe.D 等人:“日本黄萎病菌的植物相容性组”Mycoscience 38・1 (1997)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Koike.M.et al.: "PCR detction of Japanese isolates of Verticillium dahliae and V.albo-strum using European subgroup specilic primers" Microbes and Environments. 12・1. 15-18 (1997)
Koike.M.et al.:“使用欧洲亚组特异性引物对日本黄萎病菌和 V.albo-strum 分离株进行 PCR 检测”微生物与环境 12・1 (1997)。
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- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Koike.M & Nanbu.K: "Phenylalanine ammoniatyase activity in a HaHa suspension cultures treated with conidia elicitors of Verticillium -albo-atrum" Biologia Plantarum. 39・2. 349-353 (1997)
Koike.M & Nanbu.K:“用黄萎病分生孢子诱导子处理的 HaHa 悬浮培养物中的苯丙氨酸解氨酶活性”Biologia Plantarum 39・2 (1997)。
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