イネ培養細胞におけるゴルジ複合体膜タンパク質の局在化機構

高尔基复合体膜蛋白在培养水稻细胞中的定位机制

• 批准号: 05760065
• 负责人: 三ツ井 敏明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760065/
• 关键词: イネ培養細胞; ゴルジ複合体; 膜糖タンパク質; O-結合糖鎖; ブレフェルディンA

イネ培養細胞におけるゴルジ複合体構成膜タンパク質の局在化のメカニズムを解明するために、平成5年度は以下のような研究を行った。1.ゴルジ体膜からのピ-ナッツレクチン認識糖タンパク質(PNA-GP)の精製:グリセロール密度勾配遠心分離法を用いてイネ培養細胞のミクロソーム膜画分よりゴルジ体膜を単離し、SDS-PAGEによって31kDa、29kDa、23kDa、及び21kDaのPNA-GPを分離、精製した。21kDaのPNA-GPに対するポリクローナル抗体を作成し、その特異性を調べたところ、1M NaC1存在下においては23kDaと21kDaを、0.5M methy1-alpha-mannoside存在下においては21kDa PNA-GPを特異的に認識することが分かった。この結果は、23kDaと21kDa PNA-GPのN-結合型糖鎖の構造は類似しているが、ポリペプチド鎖は異なることを示している。2.PNA-GPの糖鎖構造と生合成に関する検討:PNA-GPは、PNAによって認識され、アルカリ処理及びO-グルカナーゼ処理によってPNA認識糖鎖の切断が起こることから、PNA-GPはO-結合型糖鎖を有していることが強く示唆された。さらに、PNA-GPの生成及び局在化に及ぼすBrefeldin A、Monensin、及びTunicamycinの影響を調べたところ、Brefeldin Aによってそれらは阻害されるが、MonensinとTunicamycinでは阻害は見られなかった。この結果から、このO-結合糖鎖はゴルジ複合体のシスコンパートメントで生成が始まることが示唆された(PCP(1993)34,855-863)。3.PNA-GPの遺伝子構造に関する検討:イネゴルジ複合体構成膜タンパク質の中で比較的含量の多いPNA-GPのポリペプチド鎖を特異的に認識する抗体が調製できたので、PNA-GPのcDNAクローンの調製及び構造決定を現在進めている。

The study of membrane structure of cultured cells was carried out in the following five years. 1. Purification of PNA-GP: Separation and purification of PNA-GP from cultured cells by density matching telecentric separation, SDS-PAGE and separation and purification of PNA-GP of 31kDa, 29kDa, 23kDa and 21kDa. The 21kDa PNA-GP can be used to create a polyclonal antibody and adjust its specificity. In the presence of 1M NaC1, it can be between 23kDa and 21kDa, and in the presence of 0.5 M meth1-alpha-mannoside, it can be specifically recognized by 21kDa PNA-GP. The results show that the structure of N-linked glycochains of 23kDa and 21kDa PNA-GP is similar, and the structure of N-linked glycochains is different. 2. The structure and synthesis of PNA-GP glycan lock: PNA-GP, PNA, PNA. PNA-GP production and distribution are affected by Brefeldin A, Monensin, and Tunicamycin. The result is that the O-linked glycan chain complex has been formed from a variety of materials (PCP(1993) 34, 855 -863). 3.PNA-GP cDNA structure related research: PNA-GP cDNA complex composition membrane quality in the comparison of the content of PNA-GP and PNA-GP protein selection lock specific understanding of antibody modulation, PNA-GP cDNA complex modulation and structural determination of the current progress.